实验七_黑曲霉发酵柠檬酸详解.ppt

实验七 黑曲霉发酵生产柠檬酸 实验目的 了解产物发酵生产的机理； 柠檬酸发酵的发酵条件 掌握发酵过程步骤 黑曲霉中存在TCA的酶系 柠檬酸的发酵的过程 80%的糖代谢走EMP途径 柠檬酸发酵的条件 1、合适的碳源（淀粉、麦芽糖、甘露糖等），高浓度的糖； 2、限制有机氮源、选择适量的无机氮源（铵盐）； 孢子培养基 ：要求能使菌体迅速生长，产生较多优质的孢子，所以营养不要太丰富； 发酵培养基 ：既要使菌体能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体能迅速合成所需产物 ； 3、合适的pH值，黑曲霉在pH为2～3的环境中发酵糖，产物以柠檬酸为主；当pH接近中性时则大量产生草酸， 而柠檬酸产量很低； 4、发酵液中溶氧量要高（摇床的转速250r/m）； 5、限制重金属离子，如Mn2＋缺乏促进EMP途径畅通， 控制Fe2＋含量使顺乌头酸酶活力降低，使柠檬酸积累 。 实验步骤 菌种获得 孢子悬液制备取约5mL无菌水至黑曲霉平板上，用灭菌滴管轻轻刮下孢子，振荡数下制成孢子悬液。 液体深层发酵取约4mL孢子悬液接种于玉米粉摇瓶发酵培养基中。在转速为200rpm旋转摇床上，30℃培养5～6天。 问题与思考 影响黑曲霉发酵生产柠檬酸的因素有哪些？ 黑曲霉柠檬酸pH控制 黑曲霉柠檬酸生产菌生长发育适宜PH3～7。在含糖合成培养基中，分生孢子在PH6.8—7.2发芽良好．若起始pH较低(例如4.5以下)，会强烈抑制它的发育。在PH2.5以下，分生孢子不膨胀．当pH大于7.5时分生孢子会剧烈膨胀，甚至破裂。一般认为柠檬酸发酵在菌种生长期，pH维持在4.5，而柠檬酸积累时即产酸期的最适PH 2.0～3.0，pH 3.0以上容易产生草酸，在pH 5.0容易生成葡萄糖酸(葡萄糖氧化酶最适PH 5.6)，在PH 3.0以下是柠檬酸积累的条件。 采用淀粉或薯干粉等原料的柠檬酸发酵过程中，淀粉的糖化和柠檬酸的生成和积累，是处在同一个环境中，都是由黑曲霉柠檬酸产生菌完成的。发酵的技术关键是兼顾糖化和产酸，要保证糖化速度和产酸速度之间的衔接与平衡。黑曲霉柠檬酸生产菌的酸性糖化酶的最适PH为4.0～4.6．随着pH的下降，尤其当PH降至2.2时，液化酶和糖化酶会大量破坏，而柠檬酸发酵的最佳PH是2 .0以下。要解决两者矛盾，可采用下列方法： (1)采用酸性平扳驯化，分离在高柠檬酸浓度下糖化酶活力高酌菌株； (2)通过调节风量来控制，通常在16—18h前控制低风量，使PH维持在有利于菌 种生长和糖化作用的范围。