植物制片技术01讲解.ppt

第四章植物组织化学的测定 植物组织化学的简易测定 一、淀粉 利用碘-碘化钾溶液与淀粉的特异反应。 碘-碘化钾溶液： 碘化钾2克溶于蒸馏水5毫升，再溶1克结晶碘，最后稀释溶液至300毫升。使用滴加染液即可。 土豆块茎中的淀粉 植物组织化学的简易测定 二、脂肪 苏丹黑Ⅲ、苏丹黑Ⅳ与脂肪有显色反应。 染液：0.5克苏丹黑Ⅲ溶于100毫升70%酒精。 滴染，脂肪淡黄色-红色，树脂、木栓、角质化的壁樱桃色。 三、蛋白质测定 碘一碘化钾（I-KI）溶液： 先取3克碘化钾溶于100毫升蒸馏水中，再加入1克碘，溶解后即可使用，能将蛋白质染成黄色。 植物组织化学的简易测定 四、木素测定 间苯三酚与木素相遇呈红色，并且木化程度越高颜色越深。 间苯三酚溶液：取5克间苯三酚的白色粉末溶解于95%酒精100毫升中（注意溶液呈黄褐色即失效）。 滴染，须加30%-50%的盐酸 植物组织化学的简易测定 四、果胶的测定 钌红是细胞胞间层的专性染料。果胶遇钌红呈红色。 取5-10毫克钌红溶于25-50毫升蒸馏水中即可。因不易保存，应现用现配。 滴染，10-30分；蒸馏水充分洗涤；临时制片，甘油封片。 植物组织化学的简易测定 六、纤维素的测定 1、材料先用66.5%的硫酸溶液处理，纤维变性为胶化纤维。 2、加碘一碘化钾（I-KI）溶液。 配方： 先取1.5克碘化钾溶于100毫升蒸馏水中，再加入0.3克碘，溶解后即可使用。 颜色反应为蓝色。 植物组织化学的简易测定 常用染料 卡宝品红 常用染料 卡宝品红配方： A液：碱性品红 3g 70% 酒精 100ml B液：50%石炭酸水溶液 A液可长期保存。 使用时，10mlA液+90mlB液，2周内使用。 染料新秀------ 特异的荧光染料 核染料 核染料及微管对染效果 九、封 片 材料经染色后，用药剂封藏形成可长期保存的切片，这个过程为封片。 封藏用的药剂要求有较高的折光率，并能凝固。 常用的有树胶等。 第三章植物制片的各类方法 一、徒手制片法 植物制片中最重要最常用的方法。具有瞬时观察生活组织的优点，操作简便，无需特殊的仪器设备等特点。 缺点：不能连续切片；不适宜柔软、细小和肉质化的材料。 一、徒手制片法 左手大拇指、食指和中指拿住材料，材料略高出2-3mm，切忌大拇指高于材料和其它手指。 一、徒手制片法 右手握住刀片，使刀口垂直于材料，切割时，以大臂带动小臂，均匀地切割。 一、徒手制片法 切取数片后，以沾水的毛笔轻轻蘸下，放入培养皿。 一、徒手制片法 以沾水的毛笔轻轻蘸放至载玻片 一、徒手制片法 滴一滴水，镊子夹取盖玻片，轻轻放下。 一、徒手制片法 吸取多余水分后观察 二、压片法与植物染色体研究 压片法 1.取材，预处理。 2.固定。 3.解离分为：酸解离和染色同步；酸解离；酶解离（或加酸解离）。 4.染色压片。 二、压片法与植物染色体研究 去壁低渗-火焰干燥法 1.取材，预处理。 2.前低渗：低渗溶液处理使膜膨胀 3.固定 3’酶解离 4.酶解离 4’后低渗 5.后低渗 5’制备细胞悬浮液 5”同步骤6 6’同步骤6 6.再固定、涂片、火焰干燥。 7.Giemsa染色 压片法与植物染色体研究 核型：一般指体细胞染色体在光学显微镜下所有可测定的表型特征。 1.数目、基数和倍性 2.染色体形态和结构 3.染色体分带 4.DNA和RNA的原位杂交。 5.DNA和RNA的测序 压片法与植物染色体研究 压片法与植物染色体研究 压片法与植物染色体研究 三、整体封固法 小型或扁平的整个植物体或植物器官一部分封藏在适宜的药剂中观察。 适用对象：单细胞藻、菌类、花粉、叶表皮等。 三、整体封固法 1、甘油法： 固定 清洗 10%甘油溶液干燥皿中蒸发至纯甘油纯甘油封藏。 固定 清洗 染色 10%甘油溶液干燥皿中蒸发至纯甘油纯甘油封藏。 2、糖浆法：固定 清洗 染色 糖浆封藏。 3、树胶法：固定 清洗 染色 脱水 染色 透明 树胶封藏。 四、涂片法 适用于单细胞藻类、小型群体藻类、组织疏松的植物器官。 1.取材。 2.固定。 3.解离分为：酸解离；酶解离（或加酸解离）。 4.染色涂片。 五、离析法 运用化学或机械方法溶解胞间层，使细胞分离，以观察细胞立体结构以及大小和形态。 五、离析法 常用药剂： 1、50%硝酸+氯化钾