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土壤线虫卵检查方法 漂浮法原理 几种漂浮液和蠕虫卵比重 饱和硝酸钠溶液 1.358-1.365 饱和硫酸锌溶液 1.180 饱和盐水 1.175-1.200 华支睾吸虫卵 1.170-1.190 姜片吸虫卵 1.190 日本血吸虫卵 1.200 钩虫卵 1.055-1.080 鞭虫卵 1.150 蛲虫卵 1.105-1.115 受精蛔虫卵 1.110-1.130 未受精蛔虫卵 1.210-1.230 采样与处理 方法 土壤线虫卵生活力测定法 在土壤线虫卵生活力测定法中，可选用直接镜检法，染色法和培养法，以直接镜检为常用。 土壤蛔虫卵直接镜检法： 是根据蛔虫卵在发育过程中所出现的各种形态，以鉴别其死活。 ① 鉴别受精卵和未受精卵； ② 鉴别有生活力和失去生活力(变性卵)的受精卵和含有幼虫卵的形态。 土壤蛔虫卵生活力鉴别要点 未受精蛔虫卵形态 多为长椭圆形，有时呈不规则形，大小平均为80～98×40～60 μm，一般为黄褐色，有时蛋白质壳发育不全，有时完全失去蛋白质壳，卵内经常充满大大小小油滴状的卵黄细胞。 受精蛔虫卵形态 活受精蛔虫卵 蛋白质壳为黄褐色，脱蛋白质壳的为无色透明；平均大小为50～70×40～50 μm；外层卵壳厚，内层薄，有屈光性，最外层蛋白质壳也很厚，呈乳状或花纹状突起；卵内有一个球形的卵细胞，卵壳两端和卵细胞之间，有半月形空隙，卵内卵黄颗粒清晰而致密。 含有活幼虫卵 虫体的前后部没有颗粒，中部颗粒清晰而有金属光泽，有立体感，镜检时，注视或轻压，可见有轻微蠕动，强压后，有时可挤出幼虫。 活受精蛔虫卵形态 死受精蛔虫卵(变性卵) 卵细胞移向一端，使卵壳两端呈现有大小不等的半月形空隙； 卵内脂肪变性，形成空泡，很像未受精卵； 卵细胞质浑浊，呈黑色或棕黑色； 卵细胞向不定部位呈球状收缩； 卵壳的一侧或两侧，一端或两端向内凹陷或破裂； 卵细胞颗粒减少或消失; 只有蛋白质壳，而缺内容物。 含死幼虫虫卵 幼虫体内几乎充满颗粒，且模糊不清，无金属光泽，缺乏立体 感，镜检时久久不见蠕动，稍稍加热或轻压，不会蠕动；强压时，虽能挤出幼虫，但也不改变其原来的卷曲状态。 死受精蛔虫卵形态 美蓝、伊红、硼砂染色法鉴别蛔虫卵死活 1、美蓝、伊红、硼砂染液（简称M.E.B）的配制 将0.2 g美蓝加入100 ml蒸馏水中煮沸10 min，加入硼砂0.5g，再煮沸10 min，冷却后加入伊红0.1g，待完全溶解后过滤备用。（pH为10~11，在室温中可放置1.5年）。 2、脱蛋白膜 将收集的蛔虫卵加入30 %次氯酸钠，作用1 min，并经常振荡，再用蒸馏水洗 2 次，即可脱掉蛋白膜。 3、染色镜检 ① 虫卵沉淀物加M.E.B染色液各一滴于载玻片上，上覆 盖玻片，静置3~5 min后镜检。 ② 吸取虫卵沉淀物1滴放入小试管内，加入染色液染30 分钟，再用蒸馏水洗2~3次，吸取沉淀物镜检。 （活虫卵卵壳、内含物不着色，死虫卵卵壳、内含物染成蓝色） 土壤钩虫卵的检查 虫卵及幼虫在体外的发育 　 条件 温暖(25oC～30oC)、 　 湿度(60%～80%)、　　　 　 荫蔽、氧足的疏松泥土 　 发育快 （5~8天） 1、取表层 2~3 cm土样，在 500 ml塑料烧杯中定量至 300 ml刻度（约 300 g表层土）后放入保鲜袋，注明土样编号，在记录本注明取样点、种植物类型、户主姓名、采样份数等基本信息。 2、分样筛（20目，直径 20 cm）筛网面上铺上2层棉纸（棉纸直径 28 cm），随后倒入样本土，用大镊子将颗粒较大的土块压细后将土铺展均匀。 3、将铺好的分样筛放入搪瓷盘（或不锈钢脸盆）中，加入45℃的自来水，至水的液面稍没过筛网面的棉纸为止。 4、将搪瓷盘（或不锈钢脸盆）放入水浴箱（或温箱）中，水温控制在 45℃左右，放置1.5小时。 5、取出分样筛，将搪瓷盘（或不锈钢脸盆）中的水倒入三角量杯（烧杯）中进行自然沉淀半小时。 6、缓缓弃去上清，留底部 50 ml或更少的液体，于平皿中解剖镜镜检，进行十二指肠钩虫和美洲钩虫钩蚴的鉴别和计数。 钩蚴分离注意事项 1、土样应在早上10