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TLC主要类型和原理 一、薄层色谱的定义 薄层色谱(Thin Layer Chromatography)，常用TLC表示，又称薄层层析，系将适宜的固定相（吸附剂或载体）涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层，点样，在装有流动相的密闭容器中展开后，斑点显色，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行物质鉴别、杂质检查或含量测定的定性定量分析方法。 属于固－液吸附色谱 三、薄层色谱法主要类型和原理 常用固定相：硅胶类、硅藻土类、氧化铝类、微晶纤维素类等。 按分离效能分类： 经典薄层色谱法 高效薄层色谱法 按固定相性质及其分离机制分类： 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻薄层色谱法 离子交换薄层色谱法 胶束薄层色谱法 （一）吸附薄层色谱 固定相为吸附剂（常用硅胶、氧化铝、聚酰胺）的薄层色谱法称为吸附薄层色谱法。利用被分离组分对固定相表面吸附中心吸附能力的差别，即吸附系数的差别而实现分离。 基本原理 在吸附薄层色谱中，将A、B两组分的混合溶液点在薄层板的一端，在密闭容器中用适当的溶剂（展开剂）展开。此时A、B两组分首先被吸附剂所吸附，然后又被展开剂所溶解而被解吸附，并且随着展开剂向前移动。由于吸附剂对A、B两组分具有不同的吸附能力，展开剂也对两组分有不同的溶解能力，因此当展开剂不断展开, A、B两组分在吸附剂和展开剂之间发生连 续不断的吸附、解吸、再吸附、再解吸过程，从而产生差速迁移而得到分离。 例如，当固定相为硅胶时，硅胶表面的硅醇基（呈弱酸性）可与极性基团形成氢键而表现其吸附性能，由于不同组分的极性基团与硅醇基形成氢键的能力不同，从而实现分离。极性越强的组分K值（分配系数）大，移动速度慢，Rf值就小；反之,极性较弱的组分K值小，移动速度快，则Rf值就大。若组分固定，则展开剂极性越强，K值越小，即极性越强的展开剂的洗脱能力越强，推进组分向前移动的速度越快。 （二）分配薄层色谱 分配薄层色谱法是以液体为固定相的薄层色谱法。利用试样中各组分在固定相或流动相中的溶解度差别，即在两相间的分配系数的不同，在薄层板上进行无数次的分配。 基本原理 溶质分子在固定相中溶解度较大，或在流动相中的溶解度小，则K越大。分配系数大的组分在固定相中保留较强，移动速度慢，Rf值小；分配系数小的组分在固定相中保留较弱，移动速度快, Rf值大，从而在薄层板上产生差速迁移而实现分离。根据固定相和流动相极性的相对强弱，可分为正相和反相两种类型。 1.正相分配薄层色谱 正相分配薄层色谱是流动相（展开剂）极性小于固定相极性的薄层色谱法。正相分配薄层色谱中组分极性越大,分配系数越大，随展开剂移动的速度越慢， Rf值越小。常用的固定相为含水硅胶，展开剂是极性较弱的有机溶剂。例如，用含水量大于17%（W/W）的硅胶为固定相时，硅胶表面的硅醇基完全与水分子作用，失去吸附活性，硅胶表面形成的水层成为固定相，其极性很强，以极性较弱的有机溶剂为展开剂，即为正相分配薄层色谱。 2.反相分配薄层色谱 反相分配薄层色谱是流动相（展开剂）极性大于固定相极性的薄层色谱法。反相色谱中组分极性越小，分配系数越大，随展开剂移动的速度越慢， Rf值越小。常用的固定相为烷基化学键合相，展开剂是水或水-有机溶剂的混合溶剂。 应用：分配色谱对溶解度的差别很敏感，因此适合于同系物的分离，以及酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等。 也称为空间排阻色谱法。是根据被分离组分分子的线团尺寸进行分离的一种色谱方法。其固定相是多孔性凝胶，因此又称为凝胶色谱法。凝胶色谱的原理比较特殊，只取决于凝胶孔径大小与被分离组分线团尺寸之间的关系，其分离类似于分子筛的作用。 基本原理 待分离组分在进入凝胶色谱后，会依据分子量的不同，进入或者不进入固定相凝胶的孔隙中，不能进入凝胶孔隙的分子会很快随流动相洗脱，而能 够进入凝胶孔隙的分子则需要更长时间的冲洗才能够流出固定相，从而实现了根据分子量差异对各组分的分离。调整固定相使用的凝胶的交联度可以调整凝胶孔隙的大小；改变流动相的溶剂组成会改变固定相凝胶的溶涨状态，进而改变孔隙的大小，获得不同的分离效果。 应用：被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。 （四）离子交换薄层色谱法