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离子交换固相萃取 离子交换固相萃取用于萃取分离带有电荷的分析物 固定相为带电荷的离子交换树脂，流动相为中等极性到非极性样品基质。 分析物与吸附剂间的作用是静电吸引力。 离子交换固相萃取分为阴离子交换固相萃取和阳离子交换固相萃取。 3、固相萃取的操作步骤 一个完整的固相萃取步骤包括固相萃取柱的预处理、上样、洗去干扰物质、洗脱及收集分析物四个步骤。 一是为了润湿和活化固相萃取填料，二是为了除去填料中可能存在的杂质，减少污染。 采取的方法是用一定量溶剂冲洗萃取柱。 反相类型的固相萃取硅胶和非极性吸附剂介质，通常用水溶性有机溶剂如甲醇预处理，然后用水或缓冲溶液替换滞留在柱中的甲醇。 正相类型的固相萃取硅胶和极性吸附剂介质，通常用样品所在的有机溶剂来预处理。 离子交换填料一般用3～5mL 去离子水或低浓度的离子缓冲溶液来预处理。 固相萃取填料从预处理到样品加人都应保持湿润，如果在样品加人之前，萃取柱中的填料干了，需要重复预处理过程。 a.固相萃取柱的预处理 b.上样 将样品倒入活化后的SPE 小柱，然后利用加压、抽真空或离心的方法使样品进入吸附剂。采取手动或泵以正压推动或负压抽吸方式，使液体样品以适当流速通过固相萃取柱，此时，样品中的目标萃取物被吸附在固相萃取柱填料上。 b.上样 目的是为了除去吸附在固相萃取柱上的少量基体干扰组分。 一般选择中等强度的混合溶剂，尽可能除去基体中的干扰组分，又不会导致目标萃取物流失。 反相萃取体系常选用一定比例组成的有机溶剂-水混合液，有机溶剂比例应大于样品溶液而小于洗脱剂溶液。 c.洗去干扰物质 d.洗脱及收集分析物 选择适当的洗脱溶剂洗脱被分析物，收集洗脱液，挥干溶剂以备后用或直接进行在线分析。 为了尽可能将分析物洗脱，使比分析物吸附更强的杂质留在SPE 柱上，需要选择强度合适的洗脱溶剂。 4、固相萃取基本装置 固相萃取的基本装置包括固相萃取柱和固相萃取过滤装置。固相萃取柱是整个固相萃取装置的核心。 （1）固相萃取柱 商品化的固相萃取柱（cartridge）外形类似于一个注射器针筒。还可自行填装固相萃取柱。 （2）固相萃取过滤装置 固相萃取加样过程中，需通过适当的方法使样品溶液通过固相萃取柱，使待分析物吸附在填料上。洗脱过程中，同样需要使溶剂通过固相萃取住，使待分析物解析。以上步骤需借助于固相萃取过滤装置完成，采用柱前加压或柱后加负压抽吸的方式实现。 a.固相萃取过滤-加压操作 固相萃取加压操作可通过在液体样品储液槽上方用高压空气或氮气施加一定压力来实现的。如果样品较少，可以用手动加压的方式实现。 美国Supelco公司提供的给单个固相萃取小柱加压的单管处理塞。 b. 固相萃取过滤-负压抽吸 负压抽吸是在固相萃取柱的出口用注射器手动抽负压，或与水泵或真空泵相连，用泵施加适当真空度，从而使样品溶液抽吸通过固相萃取柱。最常用的是用抽滤瓶实现负压抽吸。 * * * * * 有机相 3～5次 工业上萃取操作通常包括三个步骤： 混合萃取—分离—溶剂回收 因而工业萃取的流程中须有混合器(如搅拌混合器)、分离器(如碟片式离心机)和溶剂回收装置(如蒸馏塔)。 一般萃取过程很快，如果接触表面足够大，则在15~60 s之内就可完成。 萃取操作流程可分为单级萃取和多级萃取。 萃取步骤及方式 单级萃取 多级逆流萃取流程 多级萃取 多级错流萃取流程 有机溶剂萃取的影响因素 1）．影响萃取操作的因素： pH、温度、盐析 2）．有机溶剂的选择 3）．乳化与去乳化 pH的影响 pH对表观分配系数的影响 pH低有利于酸性物质分配在有机相，碱性物质分配在水相。 对弱酸随pH ↓K ↑ 对弱碱随pH ↓K ↓ 温 度 ◆ T↑，分子扩散速度↑，故萃取速度↑◆ T影响分配系数： 1）物质 ― T↑ 水中的溶解度↑ ∴ 萃取时 T↓使K↑ 2）T影响弱酸、弱碱的解离平衡 ◆ T影响两溶剂的互溶度影响 一般生化物质的萃取在室温或较低温度下进行 无机盐的作用： 生化物质在水中溶解度↓，有利于溶质向有机相中分配。 盐 析作用 有机溶剂的选择 根据相似相溶的原理，选择与目标产物极性相近的有机溶剂为萃取剂，可以得到较大的分配系数； 有机溶剂与水不互溶，与水有较大的密度差，黏度小，表面张力适中，相分散和相分离容易； 应当价廉易得，容易回收，毒性低，腐蚀性小，不与目标产物反应。 常用于生化萃取的有机溶剂有丁醇、丁酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、乙酸戊酯等。 反胶束（reversed micelles）是表面活性剂在非极性有机溶剂中亲水性基束自发地向内聚集而成的，内含微小水滴的，空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。是一种自我组织和排列而成的，并具热力学稳定的有序构造。 二、反胶束萃取法 Reversed micellar