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第二节 细菌的遗传分析 ? 内容： 一、转化 ? ???? 二、接合 ???? 　 一、转化 转化（transformaton）是指某些细菌通过其细胞膜摄取周围供体的染色体片段，并将此外源DNA片段通过重组参入自己的染色体组过程。只有当参入DNA片段产生新的表现型时，才能测知转化的发生。 ? ●发现 ??? 首先由Griffith（1928）首先在肺炎双球菌中发现，1949年Avery等在分子水平上加以研究，证实了转化因子为DNA。 ??? 大部分转化作用是用肺炎双球菌、枯草杆菌和流感嗜血杆菌等完成的。 ? ●转化的过程 ○供体DNA与受体细胞间的最初相互作用 ? 有4个因素影响最初的相互作用 ??????? a. 转化片段大小。 肺炎双球菌的成功转化，转化DNA片段至少有800bp，枯草杆菌至少16000bp。 ??????? b. 形态。 双链DNA ??????? c. 浓度。 对某一个特定的基因来说，供体DNA分子数目与细胞成功的转化之间有一定的相关。一般在转化一定数目DNA之前，两者成正比。如从一个抗链霉素细菌菌株提取DNA转化链霉素敏感的细胞，直到每个细胞含有10个DNA分子之前，抗性转化体的数目一直与DNA分子存在的数目直接成比例。 ??? 每个细菌摄取DNA分子数10，原因可能是细菌细胞壁有固定的DNA接受座位，一旦饱和，浓度就不再影响了。 ??????? d. 生理状态。 处于感受态(competence)。感受态发生在生长周期中某一特定的时间范围，有人认为是处于刚停止DNA合成。 ??? ○转化DNA的摄取和整合 包括结合穿入、联会和整合 a.? 结合与穿入（binding and penetration）。经历动态结合（可用DNA酶或冲淡去掉）、稳定结合和纵长被细菌摄取等过程。摄取时由外切酶或DNA移位酶（translocaes）降解其中一条链，并利用降解的能量，将另一条链拉进。 b.? 联会。单链DNA进入后与其相应的受体DNA片段联会。联会紧密程度依亲缘关系而异。 c. 整合。单链DNA与受体DNA对应位点的置换而稳定地参入(incorporate)到受体DNA中（如下图） 二、接合 ●定义 接合（conjugation）是指遗传物质从供体(donor）—“雄性”转移到受体(receptor)—“雌性”的过程。 ? ●发现 ?? 1946 Lederberg和Tatum在大肠杆菌细胞之间发现通过接合可以交换遗传物质。 ?? ○试验（实验过程）步骤（图10-5） ? a. 选材。选择双缺陷型菌株，分别是： A菌株 met-bio- ，甲硫氨酸和生物素缺陷型 B菌株 thr-leu- ，苏氨酸和亮氨酸缺陷型 ??? 选择双缺陷型目的避免回复突变的引起的误差。（回复突变率10-12) b. 混合培养A和B菌株。在完全的培养基上培养数小时。 ???? c. 培养物离心，涂布在基本培养基上培养，结果发现长出了一些原养型（met+，bio+，thr+，leu+）的菌落。 ?????? ○疑问 ???????? 是由于转化还是由于细胞直接接触而发生的遗传物质交换和重组？ ? ●U型管实验 ?? 1950年Davis设计（如下图） ?? ○先在U管底部放入滤片，该滤片可阻止细菌通过，但不影响大分子（DNA）流过。 ?? ○左管加入A菌株，右管加入B菌株。 ?? ○左管用棉塞紧，右管加抽进气管。 ?? ○右管抽进气轮流加压或抽气吸引使左右大分子完全混合。 ?? ○待两臂细胞在完全培养基中停止生长后，将它们分别涂布在基本培养上，结果都没有出现原养型，说明直接接触是必要条件。 ??? ●Hayes的试验 Hayes W （1952）实验 A菌株（链霉素处理）×B菌株 ↓ 原养型重组体的数目没有减少 　 　 ??????????? ↓ 没有重组作用发生 ?