校公选期末考模板0812.docVIP

云南农业大学 2011-2012学年第1学期 本科生期末考试（校公共选修课） 论文题目： 课程名称： 特种经济动物生产学 考试方式： 撰写课程论文 姓 名： 学 号： 专 业： 年 级： 200 级 所属学院： 学院 任课教师： 袁 峰 2011年12月  摘 要 对采自云南省宣威市玉米大斑病标样进行分离、培养及产孢，提出了一种简便易行、污染少的单孢分离法。结果表明，该病菌对蔗糖和玉米汁的利用效果较好；燕麦和燕麦桔子汁培养基更有利于菌丝的生长；光暗交替有利于产孢。为该病原菌的深入研究提供了一种简便易行的方法。 关键词：玉米；大斑病；培养基；病原菌；病斑  玉米大斑病是由长蠕孢类病菌(Exserohilum turcicum=Helminthosporium turcicum)引起的一种严重叶枯性病害，是世界上玉米主要病害之一。此病广泛发生于美洲、欧洲、亚洲和大洋洲的冷凉玉米种植区，有时还会引起其它病害如玉米根腐、茎腐等[1]。据报道，在严重流行的年份和地区，导致玉米减产50％，甚至更多[2,3]。例如美国在1951，1952和1961年，玉米大斑病大发生，曾使感病玉米每hm2减产4350多kg[4]．近年来，辽宁、云南等省区出现的玉米大斑病菌2号小种，逐渐变为优势种群，严重威胁着带Htl基因的抗病品种的推广应用[5～7]。云南省由于特殊的气候条件，各玉米种植区均有发生，特别在滇东和滇东北玉米产区发生较严重，对玉米高产、稳产造成严重威胁。为了更系统的研究大斑病菌，开展了本试验。 1 材料与方法 1.1 供试菌株 供试菌株是从云南省宣威市的玉米和马铃薯多样性混栽田块中海禾1号玉米品种上采集到的病标样单孢分离得到。 1.2 试验方法 1.2.1 单胞分离 将带有大斑病斑的叶片剪成3～4cm长段，用自来水冲洗后，放人70％的酒精中30s，用灭菌水连续冲洗数次。再置于培养皿中潮湿的滤纸上，于室温(22～24)培养2～3d后，在显微镜下镜检病斑上的分生孢子情况，并置于培养皿中的干滤纸上8～12 h后，轻轻地将孢子振落到较薄的清水琼脂培养基(16～18g琼脂，1000mL水)上，在显微镜下(1010)镜检，若1个视野只有1个孢子，则用蘸有蓝墨水的竹签正对着孢子作标记，在无菌条件下采用改造的移植环将含单个分上孢子的小胶块切下转移至斜面试管培养基(PDA)上于27温箱中培养。 1.2.2 不同培养基对玉米大斑病菌生长的影响培养基的配方 a.燕麦培养基：30g燕麦，15g蔗糖，16～18g琼脂，1000mL水。 b.燕麦玉米汁培养基：30g燕麦，15g蔗糖，25 mL玉米汁，16～18g琼脂，1000mL水。 c.燕麦桔子汁培养基：30g燕麦，15g蔗糖，25mL桔子汁，16～18g琼脂，1000mL水。 d．燕麦加桔子汁加玉米汁培养基：30g燕麦，15g蔗糖，25mL桔子汁，25mL玉米汁，16～18g琼脂，1000mL水。 将供试菌株移人装有上述4种培养基的培养皿内，倒置于27恒温培养箱中培养5d后测量菌落直径。 1.2.3 碳源对玉米大斑病菌生长的影响 以燕麦培养基为基础培养基，按照相同比例分别以蔗糖加玉米汁、淀粉、麦芽糖、葡萄糖、乳糖和蔗糖6种处理作为不同碳源，分别以不加糖为对照，接病原菌后于27恒温培养箱中连续观察培养10d，分别于第5d，7d，10d测量菌落直径，每个处理重复3次。培养基配方如下： CK：30g燕麦，16～18g琼脂，1000mL水。 A：30g燕麦，15g蔗糖，16～18g琼脂，25mL玉米汁，1000mL水。 B：30g燕麦，15g淀粉，16～18g琼脂，1000mL水。 C：30g燕麦，15g麦芽糖，16～18g琼脂，1000mL水。 D：30g燕麦，15g葡萄糖，16～18g琼脂，1000mL水。 E：30g燕麦，15g乳糖，16～18g琼脂，1000mL水。 F：30g燕麦，15g蔗糖，16～18g琼脂，1000mL水。 1.2.4 光照对大斑病菌产孢的影响 将供试菌株移人对照及不同糖的6种培养基的培养皿内，倒置于27恒温培养箱中培养10d，用棉签把菌丝刮断，放到20的恒温人工气候箱中产孢(注意稍微错开皿盖)3d．处理1：每天光照24h；处理2：每天光照12h，黑暗12h． 2 结果与分析 2.1 单胞分离 用本文所述的单孢分离方法，对从云南省13个县市的113份玉米大斑病病标样进行单孢分离，共得到239个单孢菌株，选X02—9为供试菌株。 2.2 培养基对大斑病菌生长的影响 将培养5d后的菌落，用直尺量取菌落直径，结果如图1. 图l 不同培养基对病原菌生长的影响 Fig.1 Effects of diff