马铃薯花叶病.docVIP

一 马铃薯花叶病的表现 1 叶病包括4种病毒:1925年发现的马铃薯X病毒(PVX)、1952年发现的马铃薯S病 毒(PVS)、1932年鉴定的马铃薯A病毒(PVA)及1931年记载的马铃薯Y病毒(PVY)。 （1）马铃薯X病毒 (Potato virus X 简称PVX)在马铃薯上引起轻花叶症，有时产生斑驳或环斑，病毒粒体线形，长480一580纳米，其寄主范围广，系统侵染的植物主要是茄科，病毒稀释限点100000~1000000倍，钝化温度68一75C，体外存活期l年以上。导致的症状不同，通常的症状为轻型斑驳花叶，叶片颜色深浅不一，小叶片上叶脉间产生黄色嵌斑，严重时还会产生植株顶端坏死、叶片皱缩，植株矮化。通常引起花叶,伴有矮化症状,大田可见顶花叶和系统花叶,叶片局部浓绿或叶脉坏死,叶片变窄,叶上部畸形等 （2）马铃薯S病毒 (Potato virusS 简称PVS)，在马铃薯上引起轻度皱缩花叶或不显症，多数品种上引起叶脉颜色变深、下陷，叶片粗缩，叶尖下卷，叶色变浅；有的品种感病后产生轻度斑驳、脉带；有的易感品种在感病后期叶片变成古铜色，严重皱缩，叶面产生小的坏死斑病毒粒体线形，长650纳米，其寄主范围较窄，系统侵染的植物仅限于茄科的少数植物，病汁液稀释限点1一10倍，钝化温度55一60C，体外存活期3一4天。目前主要根据在鉴别寄主昆诺黎上引起的症状不同,把Pvs分为2个株系,即Pvso(ordinarystrain)和PvsA(Andean Strain)[4.]前者在昆诺黎上引起局部坏死斑,后者引起系统斑驳症状这2个株系在马铃薯上引起的症状也不尽相同,前者单独侵染通常为隐症带毒,后者常常导致叶片青铜色,并伴有坏死斑点 马铃薯A病毒 (PotatovirusA简称PVA)病毒浸染植株后，叶片扭曲，叶间出现黄色斑驳，后期叶脉下陷，叶边缘粗缩在马铃薯上引起轻花叶或不显症病毒粒体线形，长730纳米，其寄主范围较窄，仅侵染茄科少数植物，病汁液稀释限点10倍，钝化温度44~52C，体外存活期12一18小时。PVA单独浸染常引起花叶或皱叶,有时无症状 马铃薯Y病毒 (potato virus Y 简称PVY)，PVY是一种很典型的RNA病毒在马铃薯上引起严重花叶或坏死斑和坏死条斑，病毒粒体线形，长730纳米，该病毒寄主范围较广，可侵染茄科多种植物，病汁液稀释限点100一1000倍，钝化温度52一62C，体外存活期1~2天，这种病毒引起的马铃薯病,一般分为马铃薯重花叶病、条斑垂叶坏死病、条斑花叶病条斑花叶病、点条斑花叶病 2 电子显微镜技术 3双抗体夹心酶联免疫吸附法 在酶联反应板的每个孔中加入100ul稀释好的包被液(在每10 mL包被缓冲液中加入35ul待测病毒抗体), 37摄氏温度育3~4 h,或室温 孵育5h,取待测样品约0. 5 g放入样品袋中,加入2. 0 mL提取缓冲液,研磨样品至完全磨碎。将包被好的反应板洗涤后每孔加入100ul样品液。密封后将其放入4 摄氏温度冰箱孵育过夜。反应板经洗涤后每孔加入90ul已稀释的酶标液(每10 mL包被缓冲液中加入35Ll待测病毒对应的酶标抗体), 37摄氏温度 育3~4 h,或室温下5 h洗板后每孔中加入80ul的底物溶液, 30 min左右观察结果并用酶联免疫吸附检测仪读出数据。 二 马铃薯花叶病的取样 匀桨法,称取病叶l克加PB缓冲液(O.IM磷酸缓冲液PH7.0)lml,匀浆,8000转/分离心10分钟,取上清即为病毒悬液,病毒悬液再用PB缓冲液分别稀释成10-1,10-2 ......10-5,备用. 马铃薯 X 病毒的毒源分离、繁殖和提纯用一皱缩花叶症状的东农 303 马铃薯檀株作为 接种体，摩擦接种于 白花 刺果 蔓陀 萝 (D atura stra—m onism )，以 排 除 Y 病 毒，然 后 接 种 于 千 日红G om phrena globosa)T_进行两次单斑分离 ，再接种于 普 通烟 (N ieotiana tabagurll e4．H um g M iao Y u)上繁 殖 病 毒 ，K hurana 等 的方法 ，称取冷冻毒 源叶片300 g ，以B eckan O ptima LE 一8OK 型 超速离 心机提 纯病 毒 ，用 O．2 M 磷酸氢二钠，0 ．05 M 柠檬酸三钠缓冲液(内含 O．1％二 乙基二硫代氨基 甲酸钠和 O．5％巯基乙醇) 匀浆毒源叶 片，用 7 ％正丁醇 澄清提取液 ，先用聚 乙二 醇 6000 沉 淀一次病毒 ，然后 以 10000d ra in 离心 90 m in 沉淀病毒 ，再以 10％- 40 ％蔗糖密度梯度，28000 r／m in 离心90 m in，用260