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在线二维柱切换―超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量 摘要：建立了二维柱切换超高效液相色谱法同时测定明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚含量的方法。一维色谱柱为Thermo Accucore XL C18（250 mm × 2.1 mm， 4 μm），二维色谱柱为DIONEX Acclaim phenyl1（150 mm × 4.6 mm， 3 μm），一维分析流动相为乙腈水，梯度洗脱，二维分析流动相为乙腈水，等度洗脱，14.5 min进行阀切换；检测波长：0～14.5 min为240 nm，14.5～30 min为275 nm，流速： 0.5 mL/min，柱温： 30℃。30 min即可完成明目地黄丸中莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的含量测定，并有效地将莫诺苷同分异构体分离。莫诺苷、马钱苷、芍药苷、丹皮酚的线性范围分别为7.6～377 mg/L， 9.2～459 mg/L， 8.4～419 mg/L和8.2～409 mg/L，相关系数为0.9999，加样回收率为98.3%～100.2%。本方法快捷高效，可对控制明目地黄丸质量提供参考。 关键词 ：在线二维柱切换超高效液相色谱法； 明目地黄丸； 莫诺苷； 马钱苷； 芍药苷； 丹皮酚； 同分异构体 1 引 言 明目地黄丸由熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、枸杞子、当归、白芍、山药、茯苓、泽泻、菊花、蒺藜、煅石决明等12味药组成，具有滋肾、养肝、明目之功效。方中熟地黄滋补肾阴，填精益髓，为君药，约占处方比例的18%，山药、酒萸肉、煅石决明各占处方的9%，其余8味分别占处方的7%，由于各味药成分复杂，其质量较难控制。《中国药典》2015年版一部分别采用了3种色谱系统测定酒萸肉、白芍、牡丹皮三味药材中所含主要活性成分[1～3]马钱苷、芍药苷和丹皮酚等3种成分的含量，操作费时。由于马钱苷与丹皮酚等成分极性相差较大，文献报道也多采用不同色谱系统进行分离测定[4～6]。莫诺苷（C17H26O11）是一种环烯醚萜苷化合物，为酒萸肉的主要活性成分，对缺血性脑损伤具有保护和修复作用，对神经细胞保护作用较强，根据7位的羟基朝向不同，有7α和7β 两种异构体（图1），文献对其分析方法研究较少[7，8]。近年来，二维液相色谱技术广泛应用于复杂体系的分离[9，10]，大大提高了分离效率，本实验根据测定成分的分子结构特点，采用在线二维柱切换技术，使用了两种不同类型的色谱柱，同时对莫诺苷、马钱苷、芍药苷和丹皮酚进行分析测定，还将莫诺苷两种异构体进行了分离，为更好地控制明目地黄丸的质量，研究其物质基础提供了参考依据。 2 实验部分 2.1 仪器与试剂 Ultimate 3000超高效液相色谱仪， 配双三元梯度泵、带有一个十通阀的柱温箱、二极管阵列检测器；AE240电子天平（瑞士Mettler公司）；Integral 10 MilliQ超纯水仪（德国Millipore公司）。 对照品：莫诺苷（北京市药品检验所提供，批号：201304，含量以100%计），马钱苷（中国食品药品检定研究院提供，批号：111座机电话号码3），芍药苷（中国食品药品检定研究院提供，批号：110座机电话号码8，含量以96.4%计），丹皮酚（中国食品药品检定研究院提供，批号：110座机电话号码5）。 试剂：乙腈为色谱纯；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。 2.2 溶液的配制 2.2.1 对照品溶液的配制 准确称取莫诺苷9.44 mg、马钱苷11.48 mg、芍药苷10.87 mg、丹皮酚10.24 mg，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，作为对照品贮备液。 2.2.2 供试品溶液的配制 取本品水蜜丸适量（浙江某药业，批号：110305），研细（过4号筛），准确称取0.7 g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇25 mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30 min，放置至室温，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，经滤膜过滤，待测。 2.3 色谱条件 一维色谱柱为Thermo Accucore XL C18（250 mm×2.1 mm，4 μm），左泵：乙腈为流动相A，水为流动相B，梯度洗脱： 0～5 min，6%A；5～12 min， 6%～10% A；12～15 min， 10%～70% A；15～20 min，70% A；20～26 min，70%～90% A。二维色谱柱为DIONEX Acclaim phenyl1（150 mm×4.6 mm，3 μm），右泵：流动相：乙腈水（30∶70， V/V）等度洗脱；柱温：30℃；检测波长： 0～14.5 min，240 nm；14.5～30 min，275 nm；流速： 0.5 mL/min；阀切换时间：0 min，1→2； 14.5 min，1→