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核桃分心木提取液抑菌效果初探 　　关键字：核桃分心木；分心木提取液；抑菌效果；最低抑菌浓度 　　文章编号：1005345X（2016图分类号：S664.1文献标识码：A核桃（Juglans regia L.）是壳斗目，核桃科，核桃属的一种落叶乔木[1]。吕梁地区栽种核桃历史悠久，目前结果的核桃树面积达5万hm2，全年总产量为1 740万kg，分心木的量为2 000 t。根据吕梁市十二五的规划要求，该市在十二五末要实现种植总量33万hm2，年总产7 874万kg，届时分心木的量也会达到10 000 t左右。实际生活中，核桃分心木大多被丢弃[2]，没有得到充分的利用，如果能够充分开发利用核桃分心木，将会使核桃的价值进一步提升[3-4]。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　材料：核桃分心木取自吕梁本地；大肠杆菌E.coli，金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus，均为吕梁学院实验室贮藏菌种；甲醇、乙醇、石油醚均采购于上海。 　　1.2试验方法 　　1.2.1提取液的制备甲醇提取核桃分心木中的抑菌物质：把经过风干后的核桃分心木捣碎。电子天平称取50 g样品倒进试剂瓶里，再向瓶中加450 mL甲醇（边加边搅拌），薄膜封口， 25 ℃下放置3 d，注意每天隔一段时间搅拌1次。3 d后把试剂瓶置于恒温水浴锅中回流提取60 min，将所得液体用抽滤泵滤过一次后放到旋转蒸发仪中减压浓缩。将最后的浓缩液放到60 ℃干燥箱中干燥直至有固体颗粒出现，取出并加入甲醇配置成10 mL溶液，贴上标签，置于0～3 ℃冰箱中，贮藏备用[5-6]。乙醇、石油醚提取核桃分心木中的抑菌物质：分别称取50 g样品倒进试剂瓶里，之后向试剂瓶里加450 mL乙醇和石油醚，方法同上。 　　1.2.2供试菌种活化从冰箱中取出保存的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌菌种， 25 ℃下放置24 h后将这两种供试菌在无菌条件下用接种环接种到试管培养基里面，每种细菌重复接5支；放到37 ℃的恒温培养箱中培养18 h，选择一支长势比较好的菌株作为试验菌种，其余的置0～4 ℃冰箱中冷藏备用。 　　1.2.3菌悬液的制备用接种环挑少许活化菌种放到经过灭菌后的9 mL的0.9%的生理盐水中，摇匀，10倍稀释法稀释，然后将稀释后的每个菌悬液用移液枪吸取1μL至血球计数板上再拿到显微镜下观察并计数，估算出1 mL的含菌量，反复操作直至得到含菌量为（6～7）×104个/mL的菌悬液。 　　1.2.4固体平板的制备牛肉膏3 g、蛋白胨10 g、氯化钠5 g、琼脂20 g，将上述试剂混合倒入蒸馏水至1 000 mL，调节pH到7.3；加热煮 山西果树SHANXIFRUITS 2016（3）1沸使药品完全溶解， 121 ℃灭菌30 min。待培养基温度降到55 ℃左右，在无菌条件下倒入经过灭菌且干燥后的培养皿内，每皿约175～180 mL，最后得到相同规格的12个盛有等量培养基的培养皿。 　　1.2.5不同浓度各提取液的制备把上面制成的10 mL各提取液的浓度定为1，然后将其分别连续稀释成6种不同浓度；分别是100%、50%、25%、12.5%、6.25%、3.125%的核桃分心木甲醇提取液、乙醇提取液和石油醚提取液[7]。 　　1.2.6含抑菌成分滤纸片的制备将滤纸制成半径为3 mm的小圆片数个，置于玻璃容器内，灭菌，风干。之后将其分别放到盛有7种浓度（包括对照）的3种不同提取液中浸泡 3 h后贴在烧杯壁上晾干。 　　1.2.7抑菌效果的检测按无菌操作向各培养皿中等量加入0.6 mL两种供试菌的菌悬液，用三角涂布器涂布均匀。滤纸片按规范操作放在不同含菌培养皿中，另取浸泡在甲醇、乙醇及石油醚中的滤纸片做空白对照，分别记作 ck1、ck2、ck3，每个培养皿内放7张滤纸片。置于37 ℃的培养箱里培养24 h，检测是否有抑菌圈出现，如果有抑菌圈就分别量出各抑菌圈的直径[8]。 　　1.2.8最低抑菌浓度（MIC）的测定MIC值即提取液的最低抑菌浓度，是指在培养基中完全没有菌能够存在的各提取液的最低浓度。在该试验中测定各提取液不同浓度的抗菌能力时采取固体平板，用MIC值来表示各提取液不同浓度的抑菌效果。 　　2结果与分析 　　2.1抑菌圈法测定抑菌效果 　　2.1.1核桃分心木甲醇提取液的抑菌效果由图1可知，核桃分心木甲醇提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌这2种供试菌都有抑制作用。较高浓度的提取液表现出较为明显的抑菌圈，表明抑菌能力较好，低浓度的提取液抑制效果较差，高浓度与低浓度之间的抑菌能力差别不是很明显，随着浓度的升高抑制作用差异逐渐增大但变化不太大。对照甲醇的抑菌圈直径为6 mm，为抑菌滤纸片的直径，无抑制作用，说明抑菌效果是分