碱性蛋白与酸性蛋白的显示.pptVIP

碱性蛋白与酸性蛋白的显示 目的要求 1.学会制血涂片 2.了解碱性蛋白与酸性蛋白的显示方法的原理及操作步骤 3.了解碱性蛋白与酸性蛋白的分布 实验原理 以酸性氨基酸成分为主的蛋白质为酸性蛋白;以碱性氨基酸成分为主的蛋白质为碱性蛋白。细胞核内有组蛋白（碱性蛋白）及少量酸性蛋白，细胞质中主要有酸性蛋白，标本经三氯醋酸处理抽提掉核酸后，用不同pH值的快绿染液分别染色，使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质显示出来。 实验用品 1.器材：水浴锅，染色缸，载玻片，注射器等 2.试剂：①70％乙醇溶液 ②5％三氯醋酸溶液 ③0.2％快绿 ④0.005％Na2CO3溶液 ⑤1.75mol/L HCL: 盐酸0.109ml（比重1.19）加蒸馏水至100ml（若盐酸比重1.16则取0.13ml） ⑥酸性蛋白染色液（pH2.2）：0.2％快绿和等量1.75mol/L HCL溶液混合而成 ⑦碱性蛋白染色液（pH8.0）：0.2％快绿和等量0.005％Na2CO3溶液混合而成。 3.材料：蟾蜍血涂片。 蟾蜍取血 常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷 即枕骨大孔所在处 ，右手持解剖针直插入此凹陷约l～2mm，随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消失为止。 以破坏脊髓法处死蟾蜍，将其腹面向上放人蜡盘中，剪开胸腔，打开心包。小心将心脏剪一小口，取心脏血一滴滴在干净载玻片一端，推片，按此法制备二张血涂片，室温晾干。 1取一滴血滴于玻片的一端 2以另一玻片以30-45度的角度匀速向前推片，中间不要停顿，不可反复涂片，动作要快以防止血液凝固。 3自然干燥后固定。 方法与步骤 1.新鲜血涂片自然干燥10min，入70%乙醇溶液中固定10min。 2.取出晾干入70－90℃5％三氯醋酸溶液15－20min。 3.在冷5％三氯醋酸溶液漂洗后，蒸馏水洗3次（每次5min）。 4.分别插入染色液中染色（酸性蛋白染色液染色15min，碱性蛋白染色液染色45min） 5.取出，蒸馏水洗。 6.风干，二甲苯透明2min，树胶封片。 观察结果 酸性蛋白染色时，蟾蜍红细胞质内遍布绿色，细胞核内绿色稀少。 碱性蛋白染色时，蟾蜍红细胞核为绿色。 酸性蛋白与碱性蛋白的分布有何区别？ 显示细胞核内碱性蛋白 * * 显示细胞内酸性蛋白 *