微生物检查 200版中国药典培训回答第4部分.docVIP

微生物检查2010版中国药典培训回答（第4部分：菌种传代与特定菌检测1）1.以第五代菌做阳性对照，实验过程中的接种按药典应该也算传代，那是否算是第六代菌呢？ 答：依然算第五代(接种的菌株算第5代，培养后算第6代) 2.其实验结果是算哪一代菌的？ 答：见上题 3.现在有无对照菌种可以购买？联络电话？ 答：省药检所业务科销售药典规定的标准菌株，为第二代甘油冻存管，电话：0204.菌种发放单应包括什么信息？ 答：根据自己工作的需要，大致包括：菌种名称，编号，来源，接收日期，接收人等。 5.如何检查黑曲霉孢子悬浮液孢子含量为50~100个／ml。铜绿假单胞菌单菌如果用甘油冷冻管，也是低温，是否也会影响它的活性？应如何保存？ 答：可用玫瑰红钠琼脂培养基或改良马丁琼脂来确定黑曲霉孢子悬浮液。铜绿假单胞菌应使用最终甘油浓度为20%的甘油冻存管保存，保存在-30℃或更低温度，则可保持其活性。若是斜面或营养肉汤，建议室温保存。 6.工作菌株，25℃下可连续使用一周，这里的工作菌株是指原液还是制备好的菌悬液。为何工作菌株不低温存放，而是25℃？ 答：首先要说明，所有的操作应按药典要求来操作，这里的工作菌株指原液，工作菌株建议在2-8℃保存，但要注意的是，铜绿假单胞菌的工作菌液不能低温保存，低温会损伤其活性。由于笔误，写成了25℃，请更正为2-8℃。 7.简单方便的厌氧培养方案？ 答：硫乙醇酸盐培养基；固体培养基的话可考虑使用一次性厌氧袋。 8.甘油冻存管一定要－30℃吗？0℃以下不可以吗？ 答：详见《中国药品检验标准操作规范》2010版341页。我们的甘油冻存管保存在-30℃。 9.第一代菌种可不可以作为工作菌株使用？ 答：我们不这样使用，因为担心菌株没有充分复壮，生化特性可能不典型。 10.制备菌悬液时，要使其在10~100cfu中，应多注意的地方是什么？ 答：制定标准化操作规程，减少不同实验者带来的误差，接种量、培养温度和时间应每次一致。 11.铜绿假单胞菌不宜放冰箱内保管，但其营养肉汤液能否放在冰箱保管？ 答：详见《中国药品检验标准操作规范》2010版341页。能否放冰箱可自行验证。 12.黑曲霉的存放期如何验证？ 答：通过孢子悬液计数和菌落特征，进行验证。 13.标准储备菌株必须进行纯度和特性确认？还是在必要情况下才做？ 答：详见《中国药品检验标准操作规范》2010版341页，我们在制备标准贮备菌液前进行纯度和特性确认，最好在使用前再进行纯度和特性确认。 14.铜绿假单胞菌贮存温度应为多少度？ 答：一般在10℃以上，甘油冻存管至少在-30℃以下。 15.制备工作菌种进行菌种保藏中的保存期是否要进行验证？ 答：可参考2010年版《中国药典》标准操作规程（SOP），应进行验证。 16.验证用菌株可否使用ATCC？ 答：如果按中国药典检验的，用CMCC 17.菌种鉴定该如何做？ 答：请参考讲义内容。 18.药典菌悬液制备是要菌种的新鲜培养物接种至培养基中，培养18-24h再进行稀释，制备菌悬液，可否直接使用未过期工作菌种进行稀释来制备菌悬液？ 答：按药典要求不行，如要使用，请自己验证。。 19.斜面低温保藏法：每一次的菌种传代都需要做菌种纯度鉴定吗？ 答：建议制备斜面保存管前进行菌种纯度鉴定，以后的每次传代视具体情况而定。 20.如何比较快速有效判断菌液的浓度？除了可以用“比浊仪”参考，还有什么方法？ 答：比浊仪只做辅助参考，还需通过平板计数来最后确认菌液的浓度。 21.曾于中检所中购买过黑曲霉的0代包子悬液，说明书上表示应于-20℃中保存，可保存一年，对于此保存唯独及效期，药企可否同法保存自制的黑曲霉孢子悬液？是否要验证？如何验证？ 答：黑曲霉孢子悬液制备请参照2010版药典的相关内容。关于验证在前面的问题中已经回复。 22.菌种纯度确认，怎么确认，需确认哪些项目？ 答：请参照2010版药典的相关内容。 23.细菌菌种接入营养肉汤中保存一周，这需要验证吗？、 答：建议做验证。 24.菌种斜面最多能保存菌几代？经冰箱保存的斜面菌种是否需复苏二次才能进行菌悬液配制？ 答：药典规定，菌种传代不应超过5代。冰箱保存的斜面菌种复苏后即可使用。 25.革兰氏染色的时间一般多长时间，染色时间长了对结果有无影响？ 答：详见讲义内容，应严格控制染色时间，否则对结果影响很大。 26.哥伦比亚血琼脂平皿生长的菌落，对氧化酶试验是否有影响？菌悬液的制备过程中，接种菌种新鲜培养物至营养肉汤或营养琼脂培养基中，这个新鲜培养物怎么理解，冰箱保存斜面菌种是新鲜培养物吗？ 答：没使用过哥伦比亚血琼脂及相关实验。新鲜培养物指刚培养好的菌株，冰箱保存斜面菌种不算新鲜培养物。 27.菌种鉴定时，一定要根据药典的所有试验做完，才能确认是某种菌株吗？可否省略一些试验