原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
酵母核糖核酸的分离和组分鉴定.ppt
* 二、原理 酵母核酸中主要是RNA（2.67％～10.0％），DNA含量很少（0.03％～0.516％），且菌体易于收集，RNA易分离。从酵母中提取RNA的方法很多，常用的有稀碱法和浓盐法。前者是利用稀碱使细胞壁溶解，这种方法提取时间短，但是RNA在此条件下不稳定，易分解；后者是在加热的条件下，利用高浓度盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，产品色泽较好。本实验主要目的是提取核酸进行核酸组分鉴定，对RNA稳定性要求不严格，故采用稀碱法。 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 一、目的 了解从酵母中提取RNA的原理、方法及其组分，掌握鉴定核酸组分的方法。 核酸的水解可分为化学水解和酶促水解，化学水解又可分为酸水解和碱水解。DNA对碱稳定，所以一般用酸水解DNA可得到碱基、脱氧核糖和磷酸。由于RNA存在2’－OH，使磷酸二酯键对碱不稳定，碱解可获得单核苷酸；在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀。由此即得到RNA的粗制品。加硫酸煮沸可使其水解，可获得核糖、磷酸、碱基（主要释放嘌呤碱，不易释放出嘧啶碱）。 1.磷酸与定磷试剂作用可以生成蓝色的钼蓝; 2.核糖与地衣酚试剂反应呈鲜绿色。脱氧核糖与二苯胺试剂反应生成蓝色化合物，而核糖无此反应; 3.嘌呤碱与硝酸银反应能产生白色的嘌呤银化合物沉淀。 三、材料和试剂 干酵母 定磷试剂 …… 四、操作 将5g酵母悬浮于15mL0.04M氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨均匀（此步是实验能否成功的关键，至少10min）。将悬浮液转移至锥形瓶中。再用10mL0.04M的氢氧化钠溶液分两次洗涤研钵，洗涤液并入匀浆液中。将锥形瓶置于沸浴上加热30min后，将锥形瓶置于自来水中冷却。将匀浆转移到离心管中，托盘天平上配平，离心4000r/min，8min，取上清液于洗净的锥形瓶中，并缓缓倾入二倍体积的PH=2.5酸性乙醇溶液。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，再配平，离心 4000r/min ，5min。弃去上清液，取沉淀，即RNA粗品。用1.5M的硫酸（约5ml）将沉淀分几次转移到玻璃试管内，用沸水浴加热10min（时间太短可能致使组分鉴定实验失败）制成水解液并进行组分的鉴定。 *
文档评论（0）