第3章灭菌与除菌工艺及设备-2讲解.pptVIP

第三章 灭菌与除菌工艺及设备 主讲：程爱芳（发酵工程教研室） 9329332@ 学习群：276182145 1 第一节 有害微生物的控制 2 3 第二节 培养基灭菌 第三节 无菌空气制备 第三章 灭菌与除菌工艺及设备 1 湿热灭菌的原理 2 3 培养基灭菌的方法 培养基灭菌时间的计算 第二节 培养基灭菌 4 影响培养基灭菌的因素 上节课已讲 52 大规模的工业发酵培养基如何灭菌？ 实验室培养基的灭菌是如何实现的？ 第二节 培养基灭菌 二、培养基的灭菌方法 液体培养基 固体培养基： 分批灭菌 连续灭菌 转鼓灭菌机灭菌 P55 1、分批灭菌 也称实消、实罐灭菌，是指将配制好的培养基输入发酵罐内，通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行灭菌的操作过程 。 二、培养基的灭菌方法 P55 （1）灭菌前的准备 （2）进料 （3）灭菌 ①升温 ②保温 ③降温 升温 保温 降温 实罐灭菌过程： 夹套预热 三路进汽，四路出汽 三路进汽，四路出汽 关进汽阀、排气阀 夹套冷却， 引入无菌空气维持罐压 实罐灭菌过程Flash动画： 在发酵罐中进行实罐灭菌，是典型的分批灭菌。全过程包括升温、保温、降温三个过程。 培养基间歇灭菌过程中的温度变化情况 240 150 120 时间（min) 0 50 100 150 各阶段对灭菌的贡献： 20% 75% 5% 升温 → 保温 → 降温 温度 保温 冷却 升温 2、连续灭菌 也称连消，指培养基在向发酵罐输送的同时，在罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌，冷却后送入已空消的发酵罐的灭菌法。 连续灭菌的3种流程： 01 02 03 连消塔-喷淋冷却连续灭菌流程 喷射加热连续灭菌流程 薄板换热器连续灭菌流程 60~75℃ 126~132℃ 20~30s 5~7min 40~50℃ （1）连消塔-喷淋冷却连续灭菌流程 连消塔的构造 套管式 小孔：上疏下密，向小倾45℃ 培养液在管间保持15~20s 140℃，2~3min 真空闪急冷却器 （2）喷射加热连续灭菌流程 90~120℃ 20~30s 140℃ 30~120s 20~30s （3）薄板换热器连续灭菌流程 续灭菌流程类型 预热 加热 维持保温 降温 1.连消塔-喷淋冷却连续灭菌 2.喷射加热连续灭菌 3.薄板换热器连续灭菌 3种连续灭菌流程比较 调浆罐 连消塔 维持罐 喷淋冷却器 喷射式加热器 维持管 真空冷却器 第2个热交换器 维持管 第2个热交换器 第1个热交换器 分批灭菌 连续灭菌 优 点 缺 点 分批灭菌与连续灭菌的比较 ①设备要求低，不需另外加热、 冷却装置。 ②操作要求低，适合小批量生 产规模 ③适合含大量固体物料的灭菌 ①高温短时灭菌，培养基营 养成分损失少 ②发酵罐占用时间缩短，利 用率高? ①培养基的营养物质损失大， 灭菌后培养基质量下降 ②发酵罐的利用率较低 ③不适合大规模生产的灭菌 ①设备复杂，操作麻烦，染 菌机会多 ②不适合含大量固体物料的 灭菌 该设备能承受一定压力， 装料后旋紧进出口盖，就如同密 封容器。 转鼓以0.5～1r/min徐徐转动，培养基得到翻动，蒸汽沿轴心通入加热培养基，达到一定温度后进行保温灭菌。 灭菌完毕用真空泵沿空心轴抽真空，转鼓内压力降低，培养基冷却。 3、固体培养基灭菌 采用转鼓式灭菌机灭菌。 三、灭菌时间的计算 1、分批灭菌时间的计算 【例3-1】?有一发酵罐内装50m3培养基，在121℃进行实罐灭菌。原污染程度为每1mL有2×105个耐热细菌芽孢，121℃时灭菌速率常数为2.0min－1。求灭菌失败机率为0.001时所需的灭菌时间。 2、连续灭菌时间的计算 【例3-2】 若将例3-1中的培养基采用连续灭菌，灭菌温度为131℃，此温度下灭菌速率常数为15min－1，求灭菌所需的维持时间。 四、影响培养基灭菌的其他因素 影响因素 1 5 2 3 7 微生物细胞菌龄 培养基成分 培养基物理状态 微生物细胞含水量 泡沫 4 6 pH值 空气排除情况 * 底物分子以扩散形式通过酶分子表面的水层进入活性中心，完成催化后再扩散进入有机相。 酶在有机介质中良好的分散状态对于提高酶促反应速率具有重要的意义。 * （1）配料预热罐，将配制好的料液预热到60?70 °C ，以免连续灭菌时由于料液与蒸汽温度相差过大而产生水汽撞击声； （2）连消塔，用高温蒸汽使料液温度很快升高到灭菌