第六章 酶的分子修饰 酶的化学修饰 2. 酶的分子定向进化 什么是酶分子修饰? 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变,从而改变酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。 第一节 酶的化学修饰 广义:凡涉及共价部分或部分共价的形成或破坏的转变。 狭义:较温和的条件下,以可控的方式是一种蛋白质同某些化学试剂起特异反应,从而引起单个氨基酸或其功能基团发生共价的化学改变。 酶的化学修饰的功能 1)催化机理的研究 通过对特定基团侧链的化学修饰,可比较方便的获得有关必需基团的性质,配合以保护手段还可以了解活性部位的信息。 2)有目的对目标基团进行基团改造或保护,可有目的的改变酶的活性。 3)改变酶的生理生化性质,如稳定性、最适pH、抗原性、实现特定目的的研究或应用目的。 一、酶化学修饰方法及修饰剂 修饰剂的要求 反应条件的选择 酶修饰方法 酶学性质 1、影响酶化学修饰的主要因素 (1)影响酶蛋白功能基团反应性的因素 ①微区的极性 ②蛋白质中酚基和羧基相互作用中,羧基pKa低于正常值,而酚基的pKa高于正常值。 ③静电效应 ④位阻效应 2、修饰剂的反应性 选择吸附 静电相互作用 位阻因素 催化因素 二、 修饰反应专一性的控制 (1)试剂的选择 实验目的不同,对专一性的要求也不同。 (2)反应条件的选择: 不造成蛋白质的不可逆变性。 有利于专一性修饰蛋白质 (3)反应的专
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