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PCR基因扩增 一、目的： 掌握PCR反应的基本原理与实验技术。 二、原理： PCR Polymerase Chain Reaction -聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA序列。 其基本步骤是，首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链， DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在dNTPs和Taq酶存在时，就可以合成模板DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸—变性—退火—延伸的循环可以重复多次，使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。 变性：加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链. 退火：使溶液温度降至50～60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合. 延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTPs） 三、仪器、实验用品、试剂 仪器：PCR仪、电泳仪、电泳槽、冰箱、离心机、紫外检测仪 试剂：PCR Buffer、TAE 500ml 、Ice、琼脂糖、Taq、d NTPs、溴化乙锭、marker、模板DNA、Primer1、Primer2、溴酚蓝 其它用品：移液器 （一套）、Tip（一套）、PCR管 0.2ml 、防护眼镜、一次性手套、胶带 四、实验步骤 PCR反应