DF-1细胞培养.docVIP

DF-1细胞的传代培养和保存 材料 DMEM细胞培养液：10%的DMEM细胞培养液，含10%胎牛血清。 培养温度: 39.0°C; 最大. 40.0 °C, 最小 . 38.0°C 胰酶-EDTA消化液：0.25% w/v 胰酶- 0.53 mM EDTA 溶液。 方法 弃掉细胞培养液。 用胰酶-EDTA消化液冲洗细胞单层，除掉残余的细胞培养液。 向细胞瓶内加入 2.0 到 3.0 ml的胰酶-EDTA消化液，在倒置显微镜下观察细胞直到细胞单层分散开来（一般5-15分钟）。 注意: 消化细胞时禁止剧烈拍打或摇晃细胞瓶，不易消化的细胞可以放到39°C助消化。 加入6.0 到8.0 ml 的DMEM 培养基至细胞瓶，轻轻吹吸混匀消化细胞。 取出部分细胞加入到新的细胞瓶中培养。 在 39°C培养。 传代率:一般推荐 1:2 到 1:10传代。注：1:2指一瓶传两瓶。（三）保存: 10%CS的DMEM细胞培养液加入5% DMSO。 保存温度: 液氮保存