实验一、 LD50的测定.doc

实验一、 LD50的测定 [目的] 通过实验学习测定药物LD50的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性 试验的常规。 [材料] 小鼠50只 体重17－25g，雌雄各半 注射器及针头 鼠笼 普鲁卡因 溶液（本实验以普鲁卡因为试验药物） 苦味酸溶液 [方法] 根据试验设计要求不同，下列步骤要求略有不同。 探索剂量范围 取小鼠8-10只，以2只为一组分成4-5组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组腹腔注射和灌胃普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起0％（59.15mg/kg）及100％ 333.73mg/kg 死亡率 至少应找出引起20％—80％死亡率 剂量的所在范围。 理论剂量（mg/kg） 给药剂量（mg/kg） 对数剂量 动物数（只） 存活数（只） 死亡数（只） 死亡率（%） 59.15 60（20） 1.78 4 4 0 0 91.65 90（52.5） 1.95 4 4 0 0 141． 140（132） 2.15 4 4 0 0 216.92 215 2.33 4 2 2 50 333.73 330 2.52 4 0 4 100 QQ群号：座机电话号码3 2. 进行正式试验 在预初试验所获得的0％和100％致死量范围内，选用几个剂量 一般用5个剂量按等比级数增减 ；尽可能使半数组的死亡率都在50％以上，另半数组的死亡率都在50%以下。各组动物的只数应相等或相差无几，每组10只左右，动物的体重和性别要均匀分配。完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以使能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。 理论剂量（mg/kg） 给药剂量（mg/kg） 对数剂量 动物数（只） 存活数（只） 死亡数（只） 死亡率（%） 140 140 2.14 11 10 1 9.1% 173．6 170 2.23 11 8 3 27.3% 215.3 215 2.33 11 2 9 81.8% 266.9 270 2.43 11 1 10 90.9% 331.0 330 2.52 11 3 8 72.7% LD50测定中应观察记录的项目： 实验各要素：实验题目，实验日期，室温，检品的批号、规格、来源、理化性状、配制方法及所用浓度等；动物品系、来源、性别、体重、给药方式及剂量 药物的绝对量与溶液的容量 和给药时间等。 给药后各种反应；潜伏期 从给药到开始出现毒性反应的时间 ；中毒现象及出现的先后顺序，开始出现死亡的时间；死亡集中时间；末只死亡时间；死前现象。逐日记录各组死亡只数。 尸解及病理切片：从给药时开始记时，凡两小时以后死亡的动物，均及时尸解以观察内脏的病变，记录病交情况．若有肉限可见变化的则需进行病理检查．整个实验一般要观察7-14天，观察结束时，对全部存活动物称重，尸解，同样观察内脏病变并与中毒死亡鼠尸解情况相比较。当发现有病变时，也同样作病理检查，以比较中毒后病理改变及恢复情况。 [报告要点] 1、? 结果处理 实验资料按下表列出： 受试剂量 mg/kg） 对数剂量 X 动物数 （只） 死亡动物数 （只） 死亡率 （%） 概率单位 （Y） LD50及 置信限 95%） 2、? 结果计算 （1） 根据试验设计，采用相应的方法计算LD50，一般采用简化概率法或寇氏改进法，如有计算器程序或计算机软件可使用Blisss计算法。 （2） 计算lg LD50的标准误。 （3） 计算95%可信限（必要时另计算99%可信限）。 （4） 两个LD50值的比较 当欲比较同一药物前后两次LD50测定值或两个不同药物的LD50值时，可用两组t检验法进行比较，但计算中不能直接计算LD50的差值，而应用lg LD50的差值，因在LD50计算中是采用对数剂量进行的。 注：从不同性别动物或以不同途径给药获得的结果应分别列表。若发现中毒反应和死亡率对不同动物性别有明显差别，则应选用比较敏感的性别进行复试。 [讨论题] 1、? 什么叫LD50？测定LD50的根据和意义是什么？ 2、? 测定LD50为什么要记录各种中毒现象及时间过程而不能只记录死亡只数？ 3、计算LD50的可信限的意义是什么？ 附1、 普鲁卡因LD50报告 试验药物： 给药途径： 给药日期和时间： 年 月 日 午 点 分 至 点分。 室温： 动物品种： LD50 LD50的95%可信限 中毒症状： ?报告日期： 附2、LD50的测定方法介绍 药物的急性综合毒性常以LD50来表示。LD50是指引起实验动物半数死亡的剂量。一般以每公斤体重多少毫克来表示，但毒性小的中草药也可用每公斤体重多少克来表示。实验动物常用小白鼠（或大白鼠）。给药途径应符合临床。不同的给药途径，中毒剂量可能会