ORP7论文ORP7Gate16GS28高尔基体.docVIP

ORP7论文：氧化固醇结合蛋白ORP7与Gate16相互作用调节GS28蛋白稳定性 【中文摘要】氧化固醇结合蛋白家族 Oxysterol Bingding Proteins,简称ORPs 是具有氧化固醇结合域的一类蛋白。ORP7是氧化固醇结合蛋白家族中的一员,其功能尚未阐明。在本文研究中,我们构建了人类ORP7基因的诱饵载体,通过酵母双杂交系统筛选Universal Human cDNA Library,发现ORP7与Golgi-associated ATPase enhancer of 16 kDa Gate16 蛋白能够相互作用。Gate-16具有调节高尔基体蛋白Golgi SNARE of 28 kDa GS28 稳定性的功能,并且在自吞噬形成中发挥作用。我们通过双分子荧光互补实验进一步证实了ORP7-Gate16在活细胞内的相互作用,酵母双杂交实验进一步证实ORP7的第1-142个氨基酸和Gate16 ? 的第30-117个氨基酸是它们发生相互作用的关键区域。在293A细胞中,shRNA介导的ORP7基因沉默使GS28蛋白的含量上升40%,而过表达ORP7得到相反的结果 GS28蛋白水平下降25% 。ORP7对GS28蛋白水平的调节并不是发生在转录水平,而是调节GS28蛋白在蛋白酶体途径中的... 【英文摘要】ORP7 is a member of oxysterol-binding protein OSBP family, the function of which has remained obscure. In this study, we identified by yeast two-hybrid screening an interaction partner of ORP7, Golgi-associated ATPase enhancer of 16 kDa GATE-16 , which i regulates Golgi SNARE of 28 kDa GS28 function and stability, and ii plays a role in autophagosome biogenesis. The interaction was confirmed by bimolecular fluorescence complementation BiFC assay in living cells. The interacting regions were delin... 【关键词】ORP7 Gate16 GS28 高尔基体 【英文关键词】ORP7 Gate-16 GS28 Golgi complex 【索购全文】联系Q1：1座机电话号码 Q2：1座机电话号码 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发 【目录】氧化固醇结合蛋白ORP7与Gate16相互作用调节GS28蛋白稳定性 摘要 4-5 ABSTRACT 5 第一章 前言 9-15 1.氧化固醇 9-10 2.氧化固醇结合蛋白家族 Oxysterol Binding Proteins,ORPs 10-11 3.ORP7 11-12 4.GATE-16与GS28 12-13 5.本课题的研究内容及假设 13-15 第二章 实验材料与仪器 15-23 1.主要仪器 15-16 2.实验材料 16-17 2.1 菌种、细胞与质粒 16 2.2 主要试剂 16-17 3 试剂配制 17-23 3.1 基因克隆主要试剂的配制 17-18 3.2 质粒大量抽提试剂 18-19 3.3 DNA凝胶电泳试剂 19-20 3.4 酵母双杂交实验试剂 20 3.5 SDS电泳试剂 20-21 3.6 Western Blotting实验试剂 21 3.7 细胞培养试剂 21-23 第三章 实验方法 23-39 1.质粒载体的构建 23-28 1.1 pGBKT7-ORP7诱饵质粒的构建 23-25 1.2 pGBDKT7-ORP7、DGADT7-Gate16片段载体的构建 25 1.3 双分子荧光互补实验载体的构建 25-26 1.4 shRNA载体的构建 26-28 2.感觉态细胞的制备 28 3.大肠杆菌DH5 α的转化 28-29 4.质粒大量提取 29-31 5.酵母双杂交筛选Universal Human cDNA Library 31-34 5.1 质粒pGBDKT7-ORP7转化酵母菌AH109 31-32 5.2 酵母双杂交筛选Universal Human cDNA Library 32 5.3.β-半乳糖苷酶活性检测 32-33 5.4 酵母质粒抽提 33 5.5 酵母质粒电击转化大肠杆菌DH5