兽医微生物实习总结.docVIP

动物科技学院 本、专科生毕业实习总结 姓 名： 学 院： 专 业： 班 级： 学 号： 2012年 5 月 31 日 学生姓名 学号 专业班级 指导教师 实习地点 预防兽医微生物实验室 一、实习目的、任务 1.熟悉实验室内微生物鉴定的基本流程。 2.熟练实验室内细菌的鉴定的操作 3.了解沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性； 4.熟悉沙门氏菌常规微生物学诊断法； 5.掌握沙门氏菌生化试验的方法和原理； 6．熟悉沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现； 二、实习内容 未知细菌的分离鉴定和培养，生化特性，以及微生物实验室常用的实验操作 三、实习效果与收获 通过这次实习，使我意识到了自身存在的一些不足，比如动手能力太差，对书本上的知识理解不够深入，最重要的是通过这次实习，我收获了很多。这次实习，我主要做的是对一个细菌的简单的鉴定。 沙门氏菌属 Salmonella 是肠杆菌科的一个大属，有2000多个血清型，我国发现的约有100个。沙门氏菌广泛存在于猪、牛、羊、家禽、鸟类、鼠类等多种动物的肠道和内脏中。1880年Eberth首先发现伤寒杆菌，1885年Salmon分离到猪霍乱杆菌，由于Salmon发现本属细菌的时间较早，在研究中的贡献较大，遂定名为沙门氏菌属Salmonella。本属细菌绝大多数成员对人和动物有致病性，能引起人和动物的败血症与胃肠炎，甚至流产，并能引起人类食物中毒，是人类细菌性食物中毒的最主要病原菌之一。M-R试剂V-P试剂 麦康凯培养基，呈红褐色，用于肠道菌的分离与鉴定；能分解乳糖的细菌--菌落红色；不能分解乳糖的细菌—菌落灰白色。 三糖铁琼脂，制成三糖铁高层斜面，呈红褐色，用于测定细菌对葡萄糖、乳糖、蔗糖的发酵作用及能否产生硫化氢；能发酵乳糖、蔗糖，培养基呈黄色；发酵葡萄糖不发酵乳糖、蔗糖，底层呈黄色、斜面部分为红色 少量酸接触空气而氧化细菌生长利用含氮物质,生成碱性化合物 ；能产生硫化氢，培养基呈黑色；能产气的细菌，底层琼脂内有气泡。 葡萄糖蛋白胨水，黄色液体培养基，用于增菌培养，做MR,VP试验。 蛋白胨水，无色液体培养基，用于增菌培养，做吲哚试验。 2.2 细菌的分离培养 无菌条件下将待检菌，取单菌落分别接种于普通培养基，麦康凯，恒温培养24-48小时后观察菌落的生长情况观察每种平板上细菌的生长情况，比较单个菌落的形态：染色镜检。 2.3 观察结果 观察麦康凯、普通平板上细菌生长情况。该分离菌在普通琼脂平板上可形成灰白、圆形、光滑、湿润、微隆起、边缘光滑、直径1~2mm的菌落;在麦康凯培养基上长成半透明、圆形、湿润、直径约0.5~1mm的菌落。该分离菌为革兰氏阴性小杆菌。 分离培养实验操作过程中由于实验不小心出现了写差错，麦康凯平板上长有两种菌落，粉红色与灰白色中间带一黑点的菌落。粉红色的是大肠杆菌，能分解乳糖，第一次划线处有菌苔生成，第二次划线处有较多单个菌落出现，直径约2mm，为扁形光滑突起粉红色菌落，第三次划线处基本没有菌落出现；白色中间带一黑点的菌落为沙门氏菌，不能分解乳糖，第一次划线处看不到，第二次划线处有沙门氏菌菌落，但是仅观察到3个菌落，为扁形光滑突起灰白色菌落，直径约1.5mm，第三次划线处基本无细菌。分析此培养基结果，成功分离得到沙门氏菌的菌落，达到实验目的，但是划线技术不够成熟，划线后细菌在培养基上生长的线条不优美，非常凌乱。 普通平板上也成功分离得到沙门氏菌的菌落，达到实验目的，但是依旧划线技术不够成熟，划线结果不甚理想。 挑取麦康凯培养基上的沙门氏菌的菌落，做镜检，革兰氏染色，结果显示大部分为紫色，少部分为红色，染色结果不甚理想，但是可以观察到是杆菌。革兰染色脱色时间不够，没有染好，技术不够成熟。 2.4做生化试验 2.4.1　五糖发酵试验 在无菌条件下，用接种针将分离纯化的疑似大肠杆菌单菌落接种于五糖微量反应管，并封口标号，置于37℃恒温培养22-24h后观察结果。变黄色者为阳性，不变色者为阴性。 4.2　三糖铁试验 用接种针将疑似大肠杆菌单菌落划线接种于三糖铁斜面上并进行穿刺，于37℃恒温培养22-24h后观察斜面底层颜色变化及产气情况。若斜面和底层变黑则有H2S产生。若斜面和底层均变成黄色为产酸，若为红色为产碱。 4.3　IMVC试验 吲哚试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于蛋白胨水培养基，在培养24h后的蛋白胨水培养基内加3-4滴二甲苯，摇动数次，静置1-3min，待二甲苯上升后，沿试管壁徐徐加入两滴吲哚试剂，观察其颜色变化。在二甲苯和培养物之间出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者为阴性。 甲基红试验：将疑似大肠杆菌的菌落分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，在培养24h后的葡萄糖蛋白胨水培养物内加入甲基红试剂5滴，培养基