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相关帮助 需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎 fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库,其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成,以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台 需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的,可以访问探生网biomean进行咨询,期待您的加入 感谢您的浏览 本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎,您身边的抗体专家! 受体研究技术 Techniques in receptor research 第八章 组织化学技术在受体定位中的应用 第一节 在受体定位中免疫组化的原理和方法 免疫组化的原理 免疫组织化学 Immunohistochemistry 又称免疫细胞化学 Immunocytochemistry ﹐其主要原理是用标记的抗体对细胞或组织内的相应抗原 受体 进行免疫化学反应,经过组织化学呈色后用显微镜观察受体在组织细胞中的分布和定位。 膜受体或核受体Ag 制备相应的特异性抗体 标记抗体 免疫组织化学测定 免疫组织化学优缺点 高特异性: 抗原抗体反应是特异性强,识别能力可达到单个氨基酸水平. 高度敏感性: 使用高敏感的和高亲和力的抗体﹐ 可检出细胞和组织内超微量的抗原成份。 高分辨能力: 经呈色反应 ,在受体原位形成有色沉淀或荧光, 其分辨能力远大于放射自显影技术。 免疫组织化学方法唯一的缺点是 无法测定受体-配基反应的 亲和性 Kd值 包括﹕ 1.抗原 受体 提取和纯化 抗原可为完整蛋白或一段特异性片段。 2.免疫动物或细胞融合 单克隆抗体 。 3.抗体效价检测和提取。 4.抗体标记。 5.细胞和组织标本的制备。 6. 免疫组织化学反应和显色。 7.观察和记录结果。 免疫组织化学的全部过程 免疫组织化学标本的制备 抗原 受体 的准确显示和定位与制备的组织和细胞标本质量密切相关 细胞和组织标本的取材 细胞和组织的固定 组织切片 *细胞和组织标本的取材 细胞标本 :细胞涂片 组织标本: 取新鲜组织,速冻或立即用固定剂固定. 保持细胞和组织的原有结构, 防止组织自溶.不仅使细胞和组织内蛋白质凝固,终止和抑制外源性和内源性酶活性,更重要的是最大限度地保存 细胞和组织的抗原性及防止抗原的扩散。 *细胞和组织的固定 1 固定剂一般为醛类固定剂和醇类固定剂 醛类固定剂 醛类为交联剂,其作用是交联组织中的氨基,保存抗原于原位。其特点是组织穿透力强,收缩小。 常见有:福尔马林 , 多聚甲醛 等 丙酮及醇类固定剂 该类固定剂为沉淀剂, 其作用是沉淀蛋白质和糖, 组织穿透性很强, 保存抗原的免疫活性较好 . 如乙醇 ,氯仿, 冰醋酸 等 固定组织时应注意: *力求保持组织新鲜, 勿使其干燥, 尽快固定处理. *组织块不易过大过厚, 必须小于 2cm x 1.5cm x 0.3cm, 尤其是组织块厚度须保持在0.3cm 以内. *固定剂必须有足够的量, 在体积上一般大于组织20倍。 *组织固定后, 应充分水洗, 去除固定剂, 以减少固定剂造成的人为假像. 载玻片处理 *组织切片 冰冻切片 切片厚度一般为 6μm ,神经组织的研究要求切片厚度在20-100μm 最突出的优点是能够较好地保存多种抗原的免疫活性,尤其是细胞表面抗原 如膜受体 更应采用冰冻切片.冰冻时注意减少冰晶形成. 石蜡切片 其优点是组织结构保存良好, 在病理和回顾性研究中有较大的实用价值, 能连续切片, 组织结构清晰, 抗原定位准确. 振动切片 用振动切片机 Vibratome , 对新鲜组织 切片, 组织不用固定和冰冻,也没有石蜡包埋. 免疫组织化学方法 免疫荧光组织化学 免疫酶组织化学 免疫荧光组织化学是根据抗原抗体反应的原理, 先将已知的抗体标记上荧光素, 再用这种荧光抗体作为探针检测细胞内相应的抗原。 一 免疫荧光组织化学 由于免疫组织化学的特异性、快速性和在细胞水平定位的敏感性与准确性, 免疫荧光组织化学是免疫组织化学中广泛应用于受体定位的技术之一 免疫荧光组织化学 分直接法, 夹心发, 间接法和补体法. 其中直接法和间接法最为常用。 直接法 用已知特异性抗体与荧光素结合,制成荧光特异性抗体,直接与细胞中的抗原相结合,在荧光显微镜下可见抗原存在部位呈现特异性荧光. 间接法 先用Ab1与 组织Ag结合,再用标记荧光的Ab2与Ab1结合 形成抗原--抗体--荧光抗体
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