Y染色体微缺失检测指导.docx

Y染色体微缺失是严重少精子或无精子症的重要原因，是导致男性不育的第二大遗传因素，其发生率仅次于Klinefelter综合征(克氏综合征)。从1999年开始，欧洲男科学协会和欧洲分子遗传实验质控网(EAA/EMQN)为提高诊断质量，出版了Y染色体微缺失分子诊断指南，并提供了客观的实验质量评价方法。最新版的实验室指南是2013年9月EAA/EMQN根据12年的临床积累和专家共识，在1999版和2004版的基础上修订而成。新指南重点阐明：在少精子症或无精子症男性中发现的Y染色体微缺失区域，主要是无精子因子(azoospermia factor，AZF)区域仅包含AZFa、AZFb、AZFbc、AZFc和AZFabc区，独立的AZFd区并不存在；AZFc区中gr/gr缺失是影响精子生成的一个危险因素，但临床意义尚存争议，不作为常规检查指标；检测位点增加并不能提高检测灵敏度，反而可能使结果复杂化；基于两管多重PCR的检测方法仍适用于整个AZF缺失检测。EAA/EMQN 12年国际质量评估计划(EQA计划)的实施表明，参与实验室通过规范实验操作，改善报告质量，可有效降低诊断错误率。Y染色体微缺失在中国不育男性中的发生频率为11.5%，处于较高水平，我们建议将AZF检测作为男性严重少精子或无精子症的常规检测项目，呼吁国内AZF检测实验室加入EQA计划，完善中国Y染色体微缺失检测实验操作规范。 Y染色体微缺失分子检测在中国已开展多年，国内专家对AZF缺失模式、检测序列标签位点(sequence–tagged site, STS)的数量、检测方法和内部质量控制等临床问题未达成共识。各实验室的诊断操作方法有很大不同，导致不准确或错误诊断时有发生，迫切需要建立Y染色体微缺失诊断标准和质量控制标准。EAA/EMQN更新的2013版指南对以上问题都给出了明确的专家共识，对我国建立自己的检测指南有重要的指导意义。 一、Y染色体微缺失发生频率 Y染色体微缺失在健康人群中发生率约为1/4 000，但在不育男性中显著升高，微缺失发生频率为2%～10%(甚至更高)。2013版指南指出Y染色体微缺失在中国不育男性中发生频率为11.5%，处于较高水平。2006年朱晓斌等[1]针对中国不育男性染色体的研究表明AZF微缺失在非梗阻性无精子症患者中的发生率为9.94%，严重少精子症患者中发生率为5.82%，与国内外其他学者的研究基本一致。 随着微缺失分子机制的阐明和Y染色体男性特异区域的结构(MSY)测序完成，结合十多年临床数据分析，EAA专家总结沿用Repping等[2]对Y染色体微缺失区域的定义模式，分为：AZFa区缺失、AZFb区缺失、AZFbc区缺失和AZFc区缺失，认为只有该微缺失模式有明确的临床表现。国内外学者对AZFd区缺失是否存在一直存有争议。尽管发现在AZFb与AZFc两区域之间存在新的缺失位点(一些学者认为的AZFd区缺失)，但是该区域缺失没有明确的临床意义，也并非独立存在的缺失模式。所以第四区域AZFd区缺失仍存在较多争议。Müslümanolu等[3]在2005年的一项研究中指出AZFd缺失可能与精子形成有关，但仍缺乏有力的临床证据。2013年，陈科等[4]在精子正常和轻度少精子症患者中都发现了假定的AZFd区缺失。然而，至今为止AZFd区域尚未发现与精子生成相关的候选基因，其缺失所对应的临床表型还需进一步确认。 二、gr/gr缺失不纳入常规检查项目 研究证实gr/gr缺失属于AZFc部分缺失，是影响精子生成的一个重要因素，但是否需要将其作为常规检查指标尚存争议。尽管gr/gr缺失可导致AZFc区一半以上基因丢失，但其临床意义仍不明确，因为该缺失患者精子生成表型变化多样，从少精到精子数目正常都存在。gr/gr缺失表型在不同人种和地域间存在差异，已有研究证实在欧洲白种人(除了法国人[5]和德国人[6])和西太平洋居民中，gr/gr缺失是男性生精障碍的高危因素[7]。但在部分亚洲国家如日本和中国[8,9]，gr/gr缺失在健康人群中的概率和在不育患者的概率无显著差别。李铮等[10]研究发现Y染色体gr/gr缺失既存在于严重不育男性，也存在于生精功能正常的捐精者中，缺失可能遗传自父亲，并未影响精子的发生，不能认为是精子发生的遗传风险因子。因此在中国gr/gr缺失不建议作为Y染色体微缺失常规检测的缺失模式。 三、AZF缺失基因型/表型相关性 Y染色体微缺失主要是AZF的缺失，该区域包含精子生成的相关基因家族，不同程度的缺失可导致少精子或无精子症。AZF区进一步可分为AZFa、AZFb、AZFc区域。AZFa区域缺失通常导致唯支持细胞综合征(SCO综合征)和无精子症。如果诊断为整个AZFa区域缺失，从睾丸中获得精子的概率为0。AZFb和AZFbc(P5/P1