乳腺癌相关miRA的研究进展.docVIP

乳腺癌相关微小RNA的研究进展 乳腺癌发生机制和癌细胞耐药机制至今仍尚未完全阐明；近年来科研工作者对乳腺癌相关组织或细胞中微小RNA（micro RNA,miRNA）进行了研究，为阐明乳腺癌的发生、发展机制，并对其治疗提供了崭新的思路。 　　1? miRNA简介??? 　　miRNA是一类长度约为18～25个核苷酸(nucleotide，nt)(平均22 nt)的非编码小RNA分子，通过与mRNA的3端非翻译区(3′untranslated region，3′UTR)结合而介导翻译水平的调控。miRNA基因在RNA聚合酶Ⅱ的指导下，转录成命名为primiRNA的初级转录物。然后primiRNA进入由Drosha酶和辅助因子DGCR8(Disgorge syndrome critical region gene 8)／Pasha所构成的复合体中，在细胞核中被剪切成长约60～70 nt）、具有发夹结构的miRNA前体(precursor microRNA，premiRNA)。在核膜转运蛋白（exportin）5(Exp5)的协助下，premicroRNA从核内被转运到胞质中，经Dicer酶的作用被进一步剪切成21～25 nt的成熟miRNA。成熟的miORNA整合入基因沉默复合体(RNAinduced silencingcomplex，Rlsc)形成miRISC复合物，通过直接剪切靶mRNA或者与靶mRNA的非翻译区互补结合，抑制靶mRNA的翻译、影响蛋向质的合成，从而来调控多种生物学行为。miRNA涉及的主要生物学领域有：干细胞的分化〔1〕，细胞的凋亡〔2〕，出生缺陷〔3〕以及肿瘤的发生〔4〕。 　　2? miRNA的研究方法??? 　　mRNA的研究方法主要包括两大类，即生物信息学分析和生物学实验方法。在miRNA研究的初期，生物信息学方法发挥了非常重要的作用，可为miRNA研究提供有益的线索，指导实验的进行。而生物学实验则能提供直接而有力的证据，对预测结果加以确认。二者各有优势，互为补充，有机地将miRNA的生物信息学分析方法和生物学实验方法相结合，是miRNA研究的合理选择。 　　2.1? 生物信息学分析方法 　　2.1.1? miRNA基因预测? miRNA克隆是发现miRNA基因的主要方法，但该方法存在许多缺陷，比如由于受所选取的组织样品量的限制，一些低表达量的miRNA可能会被遗漏，出现假阴性的结果。随着人们对miRNA结构特点及保守性的逐渐了解，依据miRNA在进化过程中的保守性及其茎环结构的前体结构特点编写计算机程序，对miRNA进行预测正成为寻找新miRNA基因的主要方法。Lim等使用MjrScan软件，分别在线虫和人中鉴定了30个和38个新的miRNA基因〔5〕。MirScan采用了一种独特的算法，即首先通过RNA fold软件寻找保守的并且可以形成茎环结构的序列作为候选miRNA前体，然后再与已知miRNA进行相似性比较，对候选前体评分，得分超过某一设定域值者作为候选的miRNA基因〔6〕。但只有少数候选miRNA基因已被实验确证：还有些候选基因的表达模式尚未知晓，未检测出其表达，因而出现假阳性结果〔7〕。 　　2.1.2? miRNA靶基因预测? 成熟的miRNA通过其序列5′端的2～8个碱基(seed区)与mRNA上的相应靶点结合，发挥其抑制翻译和诱导mRNA降解的功能〔8〕。人们只有先对miRNA靶基因进行预测，才能对miRNA靶基因开展鉴定和功能研究等后续工作。从已知的miRNA与靶基因的相互作用中，人们发现miRNA 5′端的seed区可以与靶mRNA 3′端UTR区或者CDS区结合。因此，这一特点被各种靶基因预测方法广泛采用。同时结合miRNA与靶基因形成二聚体的热力学稳定性和二级结构分析软件，如MFold、RNAFold和RNAhybrid等，以及将miRNA的57端与靶基因的互补情况等作为其他限制条件来进行miRNA靶基因预测。目前，不同研究小组已开发出多个miRNA靶基因预测软件，如TargetScan、miR。anda、Pictar、DIANAMicr。oT和miRBase Targets等。??? 　　不同的预测方法，其程序算法不尽相同，结果很可能有较大偏筹；为减小不同方法带来的偏差，在实际应用中，需要多种算法联合分析。例如〔9〕：当分析miRNA在人血管紧张素I型受体(hAT1R)基因上的靶位时，miRanda软件预测出27个结合位点，TargetScan预测结果超过37个结合位点，其中有8个位点与miRanda结果重复：而应用PicTar算法，却未找到结合位点。也有观点表明：至少应由上述两种算法预测出的miRNA的结合位点，才对后续的miRNA靶位的证明实