小鼠螺旋杆菌检测.docVIP

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2017-06-07 发布于重庆
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小鼠螺旋杆菌检测.doc

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小鼠螺旋杆菌检测

小鼠螺旋杆菌检测 1.先回收小鼠粪便DNA。 2．对回收的样品进行测值 3．建立PCR体系水 8ul 酶 10ul PCR体系引物F/R 0.5ul 质粒DNA 1ul 4.总共8个样品，2个内部参照物，所以总共十个样品，所有试剂都准备11份 5.取5个EP管标好F/R rod typ hep hel 按照下列顺序进行混合 F/R rod typ hep Hel 酶 110ul 110ul 110ul 110ul 110ul 水 88ul 88ul 88ul 88ul 88ul F/R 6ul 6ul 6ul 6ul 6ul 6.混匀短暂离心吸取相应的19ul液体到现行的管子内，并相应的加入1ul质粒。 7.PCR反应程序 94℃ 预变性 5Min 94℃ （变性） 45s 60℃ （退火） 45s 72℃ （延伸） 45s 72℃ （保存） 1Min 其中变性到延伸三个步骤重复35个循环 8.最后上样2%的TBe胶电泳 9.注意事项 1.酶过热容易失活所以整个体系混匀应当在冰盒上操作 2.pcr使用前应先预热，同时每次使用前做好使用记录 3.样品摆放在pcr上要均匀，平衡压力 4.使用前样品要先子啊离心机上短暂离心，把管壁上液体甩下去