4.第三章 玻片标本的制作技术2.ppt

非石蜡溶剂的脱水剂：这类脱水剂只能与水互溶，不能与包埋剂石蜡互溶。因此用这类脱水剂处理的样品，在透石蜡之前必须经过透明剂（二甲苯）的置换（透明）后，才能进行透蜡处理。这类脱水剂常见的有酒精和丙酮。 脱水兼石蜡溶剂的脱水剂：样品经过这类脱水剂处理后，不需要经过二甲苯的过渡，可直接进入样品的透蜡处理，因为这类脱水剂既可与脱水剂酒精互溶又能与包埋剂石蜡互溶,这类脱水剂常见的有正丁烷和二氧六环等。 2、脱水的方法及注意事项 1）、脱水的方法：用脱水剂逐渐取代组织中水分的过程叫脱水。常用的脱水剂有酒精和丙酮。最常用的是酒精。如果含水的样品直接进入高度酒精中，会造成组织收缩、变形、变硬和变脆，所以在脱水时一般采用逐渐脱水的方法。对大多数动、植物材料而言，可设如下浓度差进行脱水，50％、70％、80％、 90％、100％（两次）。在每一级中脱水的时间，视样品质地不同有较大差异 ，动物组织每一级脱水10～20分钟；相同大小的植物组织脱水时间应增加1～2倍方可。 对一些含水量大，柔嫩的样品（如动物的胚胎）和要求精细的制片，脱水剂的浓度级差可适当增加，如从10％、20％、30％、40％、50％…… 2）、脱水时的注意事项 （1）、脱水应在带盖的容器（如青霉素效瓶）中进行，要防止空气中的水分进入脱水剂。 （2）、在更换脱水剂时，应防止样品在移动过程中受挤压和任何损伤。 （3）、脱水到高浓度脱水剂，在更换液体时，应防止样品的自然干燥，因为脱水剂易挥发，会造成样品自然干燥。 （4）、脱水一定要彻底，否则样品不易透明，最终造成透蜡不完全，切片失败。 至此请同学们注意： 如果制作的是植物样品的石蜡切片，因植物组织细胞与动物的有很大差别，它的组织内有木质纤维，细胞表面有细胞壁，细胞内有较大的液胞，这些特殊的结构不仅可阻止一些液体的浸透速度，而且经过脱水后很坚硬，如不对其进行软化，包埋的组织块其切削性能不好，就不能切出理想的切片。因此，在制作纤维化程度较高的植物样品（如植物的幼茎、叶脉等）时，在固定洗涤结束后，一定要对其进行软化，其方法是用10％～20%的氢氟酸水溶液进行软化样品，软化的时间因样品的质地不同而异，对不同的样品需要进行试验摸索。一般情况下一些较幼嫩的植物茎，在15％的氢氟酸水溶液中浸泡7～15天就可满足要求。另外，氢氟酸对金属和玻璃容器有很强的腐蚀作用，在配制和处理样品时使用的容器一定要用塑料的。 五、透明 1、透明的目的 在石蜡切片制作过程中，透明是一个非常关键而重要的步骤，整个制片过程中需进行两次透明，一次是在样品经过脱水之后，必须对样品进行透明（置换）处理，这样才能保证包埋剂石蜡浸透到组织细胞的各个部位；第二次透明是在切片经过染色、脱水之后，也要对染色后的切片进行透明（可增强染色后切片的透明度和不同结构对照明光线的折射能力），才能进行封片。 对组织和细胞的透明其目的是：因脱水剂大都用酒精，它是非石蜡溶剂的脱水剂，所以脱水后的样品必须经二甲苯透明后，才能使包埋剂石蜡渗入到组织细胞的各个部位，凝固后起到良好的支撑作用，使组织块有良好的切削性能，以便切出厚度合适而均匀的切片。 对染色后的切片透明的目的是：通过透明改变细胞切片中个组成部分对入射光的折射性能，使视野中所观察到的结构图像衬度好、清晰度高。 2、常用透明剂及其种类 透明剂应该是石蜡的溶剂，大部分不能与水互溶。常用的透明剂有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、香柏油、丁香油、冬青油等。 目前在石蜡切片的制备中最常用的是二甲苯，其它透明剂只是在特殊需要时才使用，二甲苯既可用于动物组织及其切片的透明，也可用于对植物组织和切片的透明。 3、透明的方法 动、植物组织的透明，一般用逐渐提高透明剂的浓度，最终换入纯透明剂进行透明的方法，基本操作是：3：1的无水酒精：二甲苯；2：1的无水酒精：二甲苯；1：1的无水酒精：二甲苯；纯二甲苯二次。在各级中处理的时间动物与植物样品有较大的差异，一般是20分钟到1小时，最长不能超过3小时。同样大小的植物样品，在每级中透明的时间要延长。 4、透明应注意的问题 （1）、透明过程中要及时盖好容器的盖子，防止空气中的水分进入透明剂。 （2）、在更换每级液体时动作要快，这样既可防止样品的自然干燥，也可减少周围空气中水分的进入。 （3）、如果加入透明剂，变成不透明的雾状，说明样品脱水