乳糖操纵子发现历程.docVIP

乳糖操纵子发现历程 （本文是我在2005年为了给硕士生上课所整理的材料） 已有知识背景 1927年 H J Muller 用X-光进行诱变 1941年 George Beadle, E L Tatum 提出one gene-one enzyme 假说 1944年 Oswald Avery等 证明基因是DNA 1940年，Jacques Monod开始研究E.coli 进行乳糖代谢的一些特征研究，观察到乳糖和其他半乳糖苷可以诱导β-半乳糖苷酶的产生。他和MelvinCohn用抗β-半乳糖苷酶抗体检测酶蛋白，发现诱导后酶量增加。 进一步研究发现事情更复杂。一些神秘的突变株“cryptic mutants”能产生β-半乳糖苷酶，但是却不能在以乳糖为碳源的培养基中生长。这是什么原因呢? 为了回答这个问题，他们用放射性标记的半乳糖苷进行研究。发现野生型菌在乳糖诱导后会摄取半乳糖苷，而这种突变型菌不能。 -Lactose +Lactose Wild strain - + Cryptic mutant - - 这个实验结果有什么提示呢？ 1）在野生型菌中，有一种物质与β-半乳糖苷酶一起被诱导，它负责输送半乳糖苷进入细胞。 2）突变株中，这种物质的基因被破坏。 Monod将这种物质命名为半乳糖苷透过酶。但为此他遭到了同事们的批评，因为他在这个蛋白未分离到之前就进行命名。Monod对当时的情形作了如下描述： This attitude reminded me of that of two traditional English gentlemen who, even if they know each other well by name and by reputation, will not speak to each other before having been formally introduced. Monod和同事努力分离纯化得到了半乳糖苷透过酶。在这个过程中，他们还分离到了另一个蛋白：半乳糖苷转乙酰酶，该酶与β-半乳糖苷酶和半乳糖苷透过酶一起被诱导。 这样，到了50年代末，Monod已经知道有三种酶共同被半乳糖苷诱导。他们也发现了一些组成型突变株，不需要诱导就可以产生这三种酶。Monod认识到用遗传学分析可以加快实验进展，所以与同在Pasteur Institute工作的Francois Jacob开展了合作研究。 在Arthur Pardee的协作下，Jacob和Monod构建了局部二倍体（merodiploid），携带着野生型和组成型的等位基因。野生型等位基因证明是显性的。野生型细胞可以产生某种物质使lac基因关闭。这种物质也可以使组成型基因表达关闭，从而局部二倍体也是诱导型的。这种物质他们命名为repressor。组成型菌株的repressor基因有缺陷性突变，即lacI-。 Jacob和Monod推测，repressor和某特定DNA序列结合。（称之为operator）。这种结合是特异的，基因突变会影响这种结合。Operator的某些突变可以破坏它和repressor之间的相互作用。这样也会导致组成型表达。那么，如何区别这两种组成型突变呢? 他们俩想，如果上述假设是正确的话，那末就可以跟据这个突变是显性还是隐性来进行区别。Jacob打了一个很形象的比喻。同样也要构建局部二倍体。他把局部二倍体中的两个operator比作两个无线电接收器，分别控制进入一个房间的两扇门中的一扇。两个repressor象无线电发射器，发射同样的信号使门关闭。如果一个repressor基因发生突变（不表达），就像一个发射器坏了，另一个发射器仍会工作，两扇门仍然是关闭的。换句话，二倍体中的两个lac operon仍然是阻遏的。这种突变是隐性的。 如果是一个operator发生了突变，就像一个接收器发生了故障，所控制的门市开的。另一扇门的接收器是正常的，门仍然关闭。这样，突变的lac operon仍然是去阻遏的，表现为显性。这种突变叫顺式显性（cis-dominant）。Operator组成型用Oc表示。 在实验中，Monod等还发现两个突变株，无论有无诱导物存在都不表达lac gene。而且将该突变基因和野生型基因构成局部二倍体时，也表现出不表达lac gene。这种突变是显性的。这也是lacI基因的一种突变结果（lacIs），其产物可以与operator结合，但不能与lactose结合。 另外，还有一种突变lacI-d（dominant negative），不能与operator结合。 Repressor-operator相互作用的实验证明 Lac repressor的纯化 （1960s Walter Gilbert and Benno