酶免疫测定常用仪器设备的使用和维护技术总结.pptVIP

酶免疫测定常用仪器设备的使用和维护 卫生部临床检验中心 王露楠 主要仪器设备 加样器 加样系统 洗板机 酶标仪 全自动检测系统 酶标仪--酶标仪的发展 功能的拓展 ①更宽的测定吸光度范围。 ②从可见光扩展到紫外检测。 ③增加温控功能。 ④增加了酶动力学及凝集等测定功能。 ⑤增加了滤光片自动识别功能 ⑥增加了比色测定前的振板功能 ⑦增加了双波长或多波长测定功能。 ⑧增加定性和定量测定统计分析软件功能。 酶标仪--酶标仪的发展 适用性的拓展 ①酶标仪由通常的96孔检测模式扩展到384甚至1536孔模式，这种酶标仪对于工作量较大、检测项目较多的实验室可加快检测速度。 ②酶标仪由单纯的比色测定仪器发展至与发光、荧光、时间分辨荧光、紫外检测相结合的多功能检测仪器。此外，Wallac ViewLux也有比色、发光、荧光和时间分辨荧光测定功能。这些多功能免疫测定仪器的出现，对于实验室来说，在进行ELISA测定的同时，也可以很方便地开展使用发光、荧光、时间分辨荧光方法的检测项目，而无需再额外购买仪器设备，可大大节省实验室的空间。 酶标仪--酶标仪的使用 1.测定波长 波长范围：400 nm～750或800 nm 常用波长： 450 nm和492 nm 目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根 过氧化物酶（HRP），底物通常为四甲基联苯胺（TMB） 和邻苯二胺（OPD） 双波长比色：应有620 nm 或630 nm或650 nm和 405 nm波长的滤光片 酶标仪--酶标仪的使用 2.测定的吸光度范围 通常：在0～2.5之间即可以满足ELISA的测定 拓宽：可达到3.5以上 要求：对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围，主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何 酶标仪--酶标仪的使用 3.光学系统： 酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道（通常为八或十二通道，亦有单通道）检测，一般为硅光管或光导纤维，除测定通道外，有的酶标仪还有一个参比通道，每次测定可进行自我校准。 性能指标：吸光度范围、线性度、精密度和准确度 多通道：测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。 单通道：可避免因通道不同所致的差异 酶标仪--酶标仪的使用 4.检测速度 酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快，有利于提高检测的精密度，即避免由于测定过程中，因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。 酶标仪--酶标仪的使用 5.震板功能 震板目的：板孔内颜色均一 6.温育功能 无需再外配温箱。 温育功能只是酶标仪的一个附加功能，是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。作为实验室是否选择，则可根据自已实验室的条件及需要来决定。 酶标仪--酶标仪的使用 7.软件功能：指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其它测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等的统计分析并报告结果的功能。 灰区：软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。酶标仪如具有阳性判断值（CUT－OFF）及其测定“灰区”（即指测定吸光度处于CUT－OFF周围的一定区域，此区域内结果应为“可疑”）的统计计算功能，不但方便了实验室工作人员，而且在某些特定的情况下，有很高的实用价值。 定量：四参数方程能较好地反映免疫测定的剂量反应曲线，最为适合于定量酶免疫测定的曲线拟合。 酶标仪—酶标仪的选择 （1）工作需要 （2）酶标仪的性能：测定波长范围,滤光片配置,检测速度,吸光度范围,线性范围,分辨率,准确度,精密度等。 （3） 实验室的财力 （4）售后服务 （5）外语水平 酶标仪—酶标仪的选择 酶标仪的中心定位 仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。 光源的参照通道参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响 酶标仪--酶标仪的自检和校准 1.外观 酶标仪上应有仪器名称,型号,编号,生产厂家,出厂日期和电源电压;各调节旋钮,按键和开关均能正常工作,外表面无明显机械损伤;显示文字应清楚完整。 2.酶标仪的稳定性 漂移 选用492nm波长,在吸光度0.0A处,测定标称值为1.0A的光谱中性滤光片 测定操作按仪器说明进行 ,记录仪器示值或均值,10分钟后再次记录仪器示值或均值,前后两次测定值之差不应超过±0.005A。 酶标仪--酶标仪的自检和校准 3.吸光度测定的准确度 选用405,492和620 nm波长,以空气为参比,分别测定标称值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃滤光片,用专用测试板代替酶标板,按仪器说明连续测定3次,按下式计算准确度： △A 1/3 A1+A2+A3 -As As为标准值 ;. 4.吸光度测定的重复性