HPLC法同时测定水蜡树果中齐墩果酸和熊果酸的含量.docVIP

HPLC法同时测定水蜡树果中齐墩果酸和熊果酸的含量 　　【摘要】目的：建立同时测定水蜡树果中提取液中的齐墩果酸和熊果酸含量的方法。方法：选用SHIMADZU C18柱（250mm ×4.6mm，5μm）；检测波长为210nm；流动相为甲醇：0.1%醋酸（pH=3.4）=94：6；流速为0.5ml?min-1；柱温为20℃。结果：齐墩果酸进样量在2.24―6.72μg范围内，熊果酸进样量在2.03―6.09μg范围内线性关系良好。 　　【关键词】HPLC 水蜡树果 齐墩果酸 熊果酸 含量测定 　　一、材料、仪器与试剂 　　（1）材料。水蜡树果：采于吉林农业科技学院校园内，经专家鉴定为水蜡树果，经阴干、低温烘干处理为干品，放于干燥器内备用。 　　（2）仪器。高效液相色谱仪（真空脱气机，进样器，柱温箱，紫外检测器， SHIMADZU工作站）（LC-20A型日本岛津），岛津色谱柱（250mm×4.6mm，5μm ，C18）。索氏提取器（上海洪纪仪器设备有限公司），电子天平（ESJ205-4型，沈阳龙腾电子有限公司），固体样品粉碎机（XA-1型，金坛市恒丰仪器厂）。 　　（3）试剂。甲醇（天津市福晨化学试剂厂）；色谱纯、超纯水、醋酸分析纯（沈阳市新化试剂厂）；齐墩果酸、熊果酸对照品（中国制药生物制品检定所）；乙醇分析纯（沈阳市新化试剂厂）。 　　二、试验方法与结果 　　（一）水蜡树果齐墩果酸和熊果酸的提取 　　将干燥的水蜡树果用粉碎机粉碎，称取10.000g，用滤纸包好，置于索氏提取器中，取95%的乙醇溶液100mL，先往索氏提取器中加95%的乙醇至与虹吸管相平，剩余液体加入圆底烧瓶中，对样品浸泡2h，然后在水浴锅上加热回流至无色，控制温度在90℃左右。把回流液倒于100mL容量瓶中，超声溶解，过滤，95%定容，得待测液，放于冰箱中待用。 　　（二）色谱条件 　　250mm×4.6mm的SHIMADZUC18色谱柱，填料粒度为5μm；检测波长为210nm；流动相为甲醇：0.1%醋酸（pH=3.4）=94：6；流速为0.5ml?min-1；柱温为20℃。理论塔板数按齐墩果酸计不低于5000，按熊果酸计不低于4000。 　　（三）齐墩果酸和熊果酸对照品溶液的制备 　　分别精密称取齐墩果酸和熊果酸对照品22.40mg和20.30mg，分别置于25mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。取上述溶液各5mL，置于10mL容量瓶中，摇匀，0.25μm滤膜过滤，取滤液即得对照品混合溶液，其中齐墩果酸和熊果酸的浓度分别为0.448mg/mL和0.406mg/mL。 　　（四）水蜡树果中齐墩果酸和熊果酸的检测 　　取2.3的混合对照品溶液5μL和2.1提取液5μL（经0.25μm滤膜过滤），按2.2色谱条件分别进样分析，平行进样5次，得色谱图。 　　齐墩果酸和熊果酸对照品的保留时间分别是17.737和18.892min，水蜡树果提取液的色谱图中有两个色谱峰的保留时间分别是17.723和18.873min，根据在相同的色谱条件下保留时间相同的色谱峰是相同组分的原理，说明水蜡树果中含有齐墩果酸和熊果酸。 　　（五）齐墩果酸和熊果酸的标准曲线绘制 　　精密吸取混合对照品溶液5.0、7.0、9.0、10.0、13.0、15.0μL按2.2色谱条件进样，记录色谱图，分别以齐墩果酸和熊果酸的对照品的进样量为纵坐标，组分峰面积值为横坐标，进行线性回归，得回归方程： 　　Y齐墩果酸=7.122×10-7X-0.0315，相关系数r=0.9999 　　Y熊果酸 =8.560×10-7X-0.0421，相关系数r=0.9996 　　结果表明，齐墩果酸进样量在2.24～6.72μg范围内，熊果酸进样量在2.03～6.09μg范围内线性关系良好。 　　（六）样品含量的测定 　　取2.1制备的水蜡树果提取液10μL（经0.25μm滤膜过滤），平行进样5次，得色谱图，根据回归方程进行计算水蜡树果中齐墩果酸和熊果酸的含量，齐墩果酸和熊果酸分别是10.84和21.65mg/g 。 　　（七）稳定性试验 　　取对照品溶液分别于配制后0、1、2、4、8、12、24h，取滤液5μL注入色谱仪，记录色谱图，考察溶液放置后峰面积的变化情况，齐墩果酸和熊果酸RSD分别为0.47%和0.25%，表明对照品溶液在24h内稳定。 　　（八）重现性试验 　　精密称取水蜡树果5份，按2.1方法进行制备待测样品溶液，进样10μL，按2.2色谱条件进行分析测定，根据回归方程分别计算齐墩果酸和熊果酸含量，齐墩果酸和熊果酸RSD分别为1.63%和1.78%，说明重现性较好。 　　（九）回收率与精密度试验 　　为了考察方法的可靠性，进行了回收率