细胞器的超活染色.docVIP

实验 细胞器的超活染色 〔实验目的〕 学习细胞器的超活染色技术 观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布 〔实验原理〕 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但没有毒害的一种染色方法。它的目的是显示细胞内的某些结构而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学的变化。 根据染色剂的性质和染色方法的不同，可以将染色分为体内活染色和体外活染色。体内活染色是以胶体状的染料溶液注入动植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里。体外活染色又称超活染色，由活的动植物分离出的部分细胞或组织小块，以染料浸染，染料被选择固定在活细胞的某些结构上而着色。 活体染料与细胞作用，主要是染料电化学作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性的带阴离子，从而与细胞被染部分结合。一般对细胞无毒或毒性极小，并配成稀淡的溶液来使用。目前主要的活体染料主要为詹纳斯绿B（Janus green B）和中性红两种碱性染料。 〔试剂材料〕 器材：恒温水浴锅、镊子、剪刀，双面刀片、载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸 试剂： （1）Ringer溶液： 氯化钠8.5g 变温动物用6.5g 氯化钾 0.14g，氯化钙 0.12g, 碳酸氢钠 0.2 g，磷酸氢二钠0.01 g ，葡萄糖2 g ，蒸馏水至1000ml （2）10%、1/3000中性红溶液 0.5g中性红溶于50ml Ringer，稍加热（30-40℃）使之很快溶解，滤纸过滤，装入棕色瓶 暗处保存。临用前，取1ml 1%中性红溶液，加入29ml Ringer液混匀，装棕色瓶中备用。 （3）1%、1/5000詹纳斯绿B 50mg詹纳斯绿B于5ml Ringer中，稍加热使之溶解，滤纸过滤，即为1%溶液。取1%溶液加入49ml Ringer，即成1/5000工作液，棕色瓶中备用。 材料 人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 蟾蜍 〔内容方法〕 一、线粒体的超活染色 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，可使染料始终保持氧化状态（有色状态）呈蓝绿色，而周围细胞质无色状态，所以可专一对线粒体进行超活染色。 （一）、人口腔上皮细胞线粒体的超活染色观察 1、取清洁载玻片放于37℃水浴锅上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B染料 2、用牙签在口腔黏膜处稍用力刮取上皮细胞，放入染料中染色10-15min，注意不能使染料干掉，必要时再滴加染料。 3、上盖玻片，吸水纸吸去周围多余染液，置显微镜下观察 4、低倍镜下，选择平铺的上皮细胞，然后换高倍镜观察，可见扁平状上皮细胞细胞质中分布蓝绿色的颗粒状或短棒状结构。即为线粒体。 （二）蟾蜍肝细胞线粒体的超活染色观察 1、蟾蜍处死后立即取出肝边缘较薄的肝组织一小块放在培养皿中，用Ringer洗去血液 2、肝组织移入1/5000詹纳斯绿B染料，注意不要让组织全部浸入染液，要使组织上面部分露在染液外，当组织块边缘变为蓝绿色即可，一般染色20-30分钟 3、分离细胞：吸去染液，滴加Ringer，用解剖针或剪刀分离组织，使细胞分散出 4、装片：用吸管吸取分离的细胞液，滴一滴在载玻片上，盖上盖玻片，显微镜下观察。注意线粒体形态和分布情况。 （三）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色观察 1、在干净的载玻片上滴加一滴1/5000詹纳斯绿B，取洋葱鳞茎内表皮染色10-15min 2、吸管吸去染液，加一滴Ringer，使内表皮组织平展，盖上盖玻片进行观察 3、高倍镜下，可见液泡占了很大空间，细胞核被挤到一侧。注意寻找细胞质中的线粒体 二、液泡系的中性红超活染色观察 蟾蜍液泡系超活染色观察 青蛙或蟾蜍处死，取胸骨剑突软骨最薄的一小块，放在载玻片中央的1/3000中性红染液中染色5-10分钟 吸去染液，滴加Ringer液，盖上盖玻片进行观察 高倍镜下可见细胞为椭圆形，细胞核和核仁清晰可见，在细胞核上方胞质中可见有许多被染成玫瑰红的大小不一的泡状物，即液泡系 植物细胞液泡系的活体染色 1、小麦种子或黄豆种子培养在培养皿中潮湿的滤纸上，使其发芽，胚根伸到1cm以上 2、剪下幼苗根尖（约1-2cm长），小心切一纵面，放在载玻片上1/3000中性红染色5-10min 3、吸去染液，滴一滴Ringer液，盖上盖玻片并轻压，使根尖压平。 4、高倍镜下观察。可见粉红色液泡。 〔实验作业〕 绘制口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布 绘青蛙或蟾蜍软骨细胞示液泡系的形态与分布