毛细管电泳-电致化学发光联用技术在转基因生物体高灵敏.pptVIP

毛细管电泳-电致化学发光联用 技术在转基因生物体高 灵敏 度鉴定中的应用 啜国清 200732290067 马田 200732290057 陈丽君 200732290070 研究背景 DNAs具有较好的稳定性和可跟踪性，既所以可以通过外源性基因又可以通过新的蛋白质来鉴定转基因生物体。 但聚合酶链反应（PCR）技术测定特异性DNA序列的检测比基于蛋白质的检测更常用于转基因生物的食品和食品原料的特殊的安全评估。 高分辨率 低分离时间 毛细管电泳 （CE） 短光路长度 小样本量注射 低检测限 优 劣 CE偶联化学发光（CEL）检测器 高灵敏度 低成本 操作简便 定性和定量检测转基因生物 高速筛选平台系统 大量样 本量 一定浓度发光体（通常为Ru(bpy)32+)存在下的ECL共反应物分析，但其运用被有效共反应物的缺乏所限制。 系统重点 研究意义 本文介绍的方法与以前的CE-ECL最大主要的区别是目标分析物。 该法重点在于ECL标记物上的分析，而之前的方法强调ECL共反应物的分析。那些不能被基于共反应物的CE-ECL法检测到的生物分子可以被这种基于标记物的方法检测到。 实验流程 琼脂糖 凝胶电泳 CE-ECL系统的建立 基因组 DNA的 提取 引物 标记 过程 PCR反应 条件 毛细管 电泳 CE-ECL系统 DNA变性95。C 10, 95。C下30s35转59。C1min,72。C30s; 扩增72。C10min. 琼脂凝胶电泳 毛细管电泳 从CRM标准品和样品提取基因组DNA 基因组DNA的提取 引物标记过程 Ru(phen)32+激活、标记，提纯 PCR反应 电泳 实验方法 结果及分析 ECL 发光基团在PCR扩增前标记到引物； Ru(phen)32+标记引物在4℃下稳定保存7天 筛选矩阵 跑缓冲液 应用电压 进样时间 引物的浓度和比例 DNA模板浓度 Mg2+和dNTP的浓度 退火温度 信噪比 RRS的检测 最优PCR 条件 CE条件的优化 Ru(phen)32+标记引物的稳定性和PCR扩增效率的研究 （S/N） 实验结论 当ECL发光基团在扩增前被标记到PCR引物上时，其标记引物能够在4℃温度下稳定的保存超过7天，而且在ECL标记后，PCR扩增效率并没有明显降低。 该法能被用来检测RRS，其相应检测限在35 个PCR循环下为0.01%（S/N5）。 评价 这篇论文将CE这种生化分离技术和ECL这种在免疫和DNA探针分析中有广泛应用的分析技术相结合，发挥其高效率分离，高灵敏度检测的优点，满足实际分析的需求。将这种技术与分子生物学、临床医学、药物学等领域的相关研究相结合，就将其应用于临床诊断，重大疾病标识物的筛选与检测。 研读文献 Capillary Electrophoresis with Electrochemiluminescent Detection for Highly Sensitive Assay of Genetically Modified Organisms THANK YOU!