实时荧光定量PCR服务(RealtimePCR).docVIP

实时荧光定量PCR服务 Real time PCR 实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。在常规PCR基础上添加荧光染料或荧光探针荧光染料能特异性掺入DNA双链，发出荧光信号，而不掺入双链中的染料分子不发出荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物增加完全。实时荧光定量PCR（Real Time PCR， RT-PCR）避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。与常规PCR相比，实时荧光定量PCR具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果。它涉及到DNA或RNA样品制备，反转录及PCR反应等一系列重要的分子生物学过程。DNA芯片的很多结果需要定量PCR来验证，客户从基因芯片上得到有表达差异的基因后，可通过定量PCR的方法进一步确认，提高芯片结果的可靠性。 我们使用Roche lightcycler提供定量PCR服务的流程如下： 目前提供定量PCR检测的方法有： 1.SYBR检测，每个基因，每个样品重复三次 2.Taqman 检测，每个基因，每个样品重复三次 3.杂交探针检测，每个基因，每个样品重复三次 　荧光定量PCR服务要求 1、请您提供新鲜的且尽量多的材料（），或直接提供纯化好的总RNA（大于5ug／样品），或提供纯化好的DNA（大于5ug／样品）　。 2、请通过E-mail提供已知的全长基因序列。 3、请提供尽可能详细的背景资料：DNA／RNA　来源、丰度等 荧光定量PCR操作程序　客户提供待检基因的相关材料，与客户共同制定实验方案。　2、 签订技术服务合同，商定服务收费、任务期限等。需预付实验总费用的50%作为实验预付款。　3、 PCR所需的引物，客户提供或委托本公司设计合成。　4、 RT-PCR实验：DNA/RNA的抽提、定量、反转录、PCR扩增、电泳等。　5、 实验结果的分析，向客户提供详细的实验报告，包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、照片及相关分析数据等，如有必要可以协助客户进行相关的数据处理和分析。