半夏泻心汤及其拆方调节胃肠运动的缝隙连接机制研究.pptVIP

半夏泻心汤及其拆方调节胃肠运动的缝隙连接机制研究 蒋锋利 研究背景 半夏泻心汤出自《伤寒杂病论》，具有降逆止呕，消痞散结的作用，因其在治疗胃肠运动功能障碍性疾病方面有可靠疗效，不仅受到众多伤寒名家的推崇，而且也一直是中医学方药实验研究的热点之一。 我校名老，伤寒大家刘渡舟先生曾对其这样描述：“半夏、干姜辛开而温，以散脾气之寒；黄芩、黄连苦泄而寒，以降胃气之热；人参、甘草、大枣甘温调补，和脾胃，补中气，以复中焦升降功能，此即辛开苦降甘补之法” 。 拆方思路——“法依病机，拆方依法” 分组 药味 辛开组 半夏、干姜 苦降组 黄连、黄芩 甘补组 人参、甘草、大枣 缝隙连接（gap junction，GJ）是动物细胞间最普遍存在的细胞连接方式，存在于除血液细胞和骨骼肌细胞以外的所有组织和细胞中，是相邻细胞间的膜通道结构，对细胞的新陈代谢、内环境增殖和分化等生理过程起着重要的调控作用。 主要研究内容 前期研究表明：半夏泻心汤及其拆方可通过ICC调节胃肠的运动功能，而平滑肌细胞（smooth muscle cell，SMC）与胃肠神经以及ICC之间，存在着网络状连接。这种细胞网络结构可以产生慢波和传导电兴奋，并介导神经递质的产生和调节，对揭示多种胃肠道功能障碍性疾病的发病机制具有重要作用。 在胃肠道中，GJ是介导SMC间电化学信息交流，保证肌肉活动的协调性和同步性的特殊通道。这为探讨胃肠肌电活动及胃肠动力的关键机制提供了线索：阻断胃肠SMC之间的缝隙连接可以阻碍胃肠的运动功能 据此，我们提出半夏泻心汤具有通过胃肠细胞间缝隙连接通讯调节胃动力作用的假说。并以缝隙连接蛋白Cx43为切入点来展开研究工作，以期从细胞间通讯角度，进一步揭示“心下痞”的内涵及半夏泻心汤调节胃肠运动的分子机制。 技术路线 半夏泻心汤及其拆方药物血清的制备 对SMC细胞间通讯的直接影响 对SMC细胞间通讯受抑制模型的影响 SLDT法检测SMC的GJIC情况及激光共聚焦显微镜观察SMC内的[Ca2+]含量 采用ELISA法检测含药血清对SMC细胞的肌钙蛋白、NO、nNOS分泌的影响 Western blot、 SABC法检测Cx43、PKC、PKA、MPA的表达 MTT法测SMC增殖、流式细胞法测SMC凋亡及周期变化 实时荧光定量PCR法检测Cx43、PKC、PKA、MPA 实时荧光定量PCR法检测SMC依赖型[Ca2+]释放通道受体IP3R、PyR的mRNA表达 利用RNA细胞干扰技术将构建好的CX43-siRNA质粒转染致SMC 预计成果 构建CX43-siRNA质粒，观察CX43表达受抑制时，对SMC间细胞通讯的影响。 从细胞间通讯角度，进一步揭示“心下痞”的内涵，以及半夏泻心汤调节胃肠运动的分子机制。 发表文章，2篇。 人员组成简介 编号 姓名 工作单位 项目分工 1 陈萌 北京中医药大学 研究思路及总体设计指导 2 李丽娜 北京中医药大学 动物血清制备及分子生物学实验指导 3 张冬梅 北京中医药大学 质粒构建与细胞转染指导 4 王淑艳 北京中医药大学 细胞培养指导 5 李翠 北京中医药大学 动物血清制备 6 李超慧 北京中医药大学 质粒构建与细胞转染 7 谢得慧 北京中医药大学 细胞培养 8 强兴 北京中医药大学 分子生物学实验 经费使用说明 项目 申请经费 具体说明 材料费 0.5万 孕鼠，细胞培养用试剂和耗材，分子生物学实验所需试剂盒、抗体等 测试化验加工费 0.3万 激光共聚焦电镜、PCR仪、质粒测序、酶标仪检测费 出版/文献/信息传播/知识产权事务费 0.4万 期刊版面费 谢谢