DNA指纹图谱技术精选.pptVIP

利用rRNA 基因序列研究微生物多样性可采用不同的策略，目前一般常用以下几种方法： 二、以DNA指纹图谱技术为基础的微生物多样性研究方法 1、变性梯度凝胶电泳和温度梯度凝胶电泳 2、单链构象多态性 3、限制性片段长度多态性 4、末端限制性片段长度多态性 5、随机引物扩增多态性 6、扩增rDNA限制性酶切片段分析 。。。 。。。 变性梯度凝胶电泳（DGGE）和温度梯度凝胶电泳（TGGE） 二、以DNA指纹图谱技术为基础的微生物多样性研究方法 原理 在聚丙烯酰胺中加入甲酰胺，从正极到负极梯度递加，或是形成温度梯度，电泳中的DNA到达它的变性甲酰胺浓度或温度时，双链部分解开，造成泳动速度发生变化，从而达到分离效果。 1、变性梯度凝胶电泳（DGGE）和温度梯度凝胶电泳（TGGE） 二、以DNA指纹图谱技术为基础的微生物多样性研究方法 步骤 （1）样品总DNA提取； （2）样品16S或18SrDNA片段的PCR扩增及纯化；（3）制取变性梯度聚丙烯酰胺凝胶； （4）染色； （5）样品的DGGE分析； （6）割胶测序。 DGGE 2、单链构象多态性（SSCP） 二、以DNA指纹图谱技术为基础的微生物多样性研究方法 不同碱基序列的单链 DNA 分子构象不同，DNA片段变性成单链后受到凝胶分子筛不同作用力，最终使不同DNA片段得到分离。电泳结束后可以将不同的条带