基因打靶技术剖析.ppt

* * * * * hd447 基因打靶技术 什么是基因打靶？ 基因打靶（gene targeting）是指外源DNA与受体细胞染色体DNA上的同源序列之间发生重组，并整合在预定位点，改变细胞遗传特性的方法 建立在胚胎干细胞（embryonic stem cell，ES细胞）与同源重组技术基础之上的基因打靶技术是一种定向改变生物活体遗传信息的实验手段 基因打靶的原理 基因打靶的主要步骤 重组基因载体的构建 导入受体细胞 筛选 检测 打靶载体的构建 基因打靶载体包括载体骨架、靶基因同源序列和突变序列及选择性标记基因等。 基因打靶载体： 基因插入型载体(Gene-insertion vector)：插入型载体中与靶基因同源的区段中含有特异的酶切位点，线性化后，同源重组导致基因组序列的重复，从而干扰了目标基因的功能。 基因置换型载体(Gene—replacement vector)：置换型载体进行线性化的酶切位点在引导序列和筛选基因外侧，线性化后，同源重组使染色体DNA序列为打靶载体序列替换。大多数基因敲除突变都采用置换型载体进行基因打靶。 2、外源DNA导入的方式外源DNA导人的方式主要有显微注射法、电穿孔法和逆转录病毒法等 显微注射每次只能注射一个细胞； 电穿孔法可同时使许多细胞得到转染。Mansour等研究发现电穿孔可使1％的ES细胞稳定转染； 逆转录病