微生物的培养与分离一轮学案分析.doc

微生物的考纲要求 微生物的分离和培养 【复习要求1.理解培养基对微生物的选择利用并能利用选择培养基分离微生物 2.掌握培养微生物的过程、条件和方法 3.掌握测量微生物数量的方法、统计菌落数量的方法 4.能利用选择培养基分离微生物的方法 基础一、微生物的实验室培养 1．培养基 概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。营养要素 来源 功能 碳源 无机氮源 CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物 ①构成细胞中的物质和一些代谢产物；②既是碳源又是能源 有机碳源 糖类、脂质、蛋白质、有机酸、石油、花生粉饼等 氮源 无机氮源 无机氮：NH3、铵盐、硝酸盐、N2等 将无机氮合成含氮的代谢产物 有机源 牛肉膏、蛋白胨、核酸、尿素、氨基酸 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物 生长因子 维生素、氨基酸、碱基 ①酶和核酸的组成成分；②参与代谢过程中的酶促反应 分类和应用划分标准 培养基种类 特　点 用　途 物理 性质 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 观察微生物的运动、分类、鉴定 培养基 微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种 化学 成分 培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 培养基 培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成) 分类、鉴定 用途 培养基 培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长 培养、分离出特定微生物(如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度) 培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 鉴别不同种类的微生物，如可用培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽) 2．无菌技术 ①消毒和灭菌的区别 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 化学药剂消毒法 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 _____灭菌法 玻璃器皿、金属工具 _____灭菌法 培养基及容器的灭菌 ②三种常用灭菌方法的比较 灭菌方法 适用材料或用具 灭菌条件 灭菌时间 灼烧灭菌 接种环、接种针或其他金属工具 酒精灯火焰的充分燃烧层 直至烧红 干热灭菌 玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等 干热灭菌箱内， ℃～ ℃ 1 h～2 h 高压蒸汽灭菌 培养基等 高压蒸汽灭菌锅内kPa， ℃ 15 min～30 min 3．实验操作 (1)牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备 计算→称量→→灭菌→(2)微生物的分离方法方法 平板划线法 稀释涂布平板法 注意事项 (1)接种环的灼烧：①第一次划线前：接种环上的微生物，避免污染培养物②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自______划线末端③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者(2)灼烧接种环之后，要______后再进行操作，以免温度太高杀死菌种 (3)划线时最后区域不要与第__区域相连 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基______ (1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应离火焰1～2 cm处(2)涂布平板时： ①涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃 ②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精 ③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体 目的 在培养基上形成由单个菌种繁殖而来的子细胞群体——菌落 培养 平板冷凝后培养，使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们体内能合成脲酶 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中 起到催化作用。菌种筛选：使用_______是唯一氮源的_______培养基培养。统计菌落数目：常用方法有、显微镜直接计数法。直接计数法：这种方法是利用血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点是不能区分死菌与活菌。间接计数法(活菌计数法)：稀释涂布平板法，常用来统计样品中．实验流程： 土壤取样→制备培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。 观察记录结果：每克土壤样品菌数＝某稀释倍数的菌落平均数×。 鉴定方法