第18章船长系列：原核基因表达调控剖析.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 转录-翻译的偶联调控 色氨酸操纵子示意图 广义衰减区 色氨酸操纵子前导序列 色氨酸操纵子前导序列 色氨酸操纵子前导序列 前导序列 Trp 前导mRNA最稳定的二级结构。衰减作用 依赖于12， 34的配对发夹结构。34配对是终止信号 Trp大量时，核糖体移动顺利通过12，34发夹形成。核糖体顺利通过1翻译完前导肽，在终止密码停顿。这样34发夹形成，转录终止，释放RNApol Trp少的时候，因为被tRNA携带的Trp减少，会导致核糖体在1处停留，其停留导致12发夹不能形成，23发夹结构（衰减结构）形成，而23的形成导致34不能形成，故RNA聚合酶可以一直转录下去ABCDE 衰减子作用 前导序列发挥了随色氨酸浓度升高而降低转录的作用，这段序列称衰减子 色氨酸浓度决定了核糖体经过前导区继续转录的能力 核糖体在 mRNA 上的位置决定前导序列中终止发夹结构的生成，从而决定 RNA 聚合酶通过衰减子的能力 而当其他氨基酸短缺或所有的氨基酸都不足时，细菌是打开色氨酸操纵子呢还是关闭呢？ 核糖体翻译移动的速度更慢，甚至不能占据 1 区的序列，结果有利于 1 和 2 发夹结构的形成，于是 RNA聚合酶停止转录，等于告诉细菌：“整个氨基酸都不足，即使合成色氨酸也不能合成蛋白质，不如不合成以节省能量”。 停则不停 不停则停 关于色氨酸操纵子 CHECK YOUR UNDERSTANDING 如果使用定点突变的手段将大肠杆菌色氨酸操纵子前导肽的起始密码子突变成UGA，那么色氨酸操纵子将 当前导肽的起始密码子突变成终止密码UGA后，转录出的mRNA由于没有核糖体与之相结合，因此就自然的形成了1、2配对，3、4配对的终止结构。因此，在这种情况下，RNA聚合酶在衰减子处终止，不管细胞内Trp水平的高低，总是被阻遏。 CHECK YOUR UNDERSTANDING 讨论题.大肠杆菌色氨酸操纵子中如果出现了下列突变，请分析一下大肠杆菌对色氨酸浓度的敏感性将如何变化。 A．前导序列中连续的色氨酸密码子数增加B．在前导序列的两个连续的色氨酸密码子中间插入两个其他氨基酸的密码子?C．将前导序列中两个色氨酸密码子突变为终止密码子 * * * 模板来自于 * * * * * 模板来自于 * * * * 调节基因 （regulator gene）转录生成 mRNA 并翻译出 调节蛋白（regulator protein） ， 该蛋白就是反式作用因子，这一蛋白能够结合到 DNA链上一段目标区域（target site）从而调控目标区域下游结构基因的表达。这个目标区域的 DNA 就是顺式作用元件 基因是编码可扩散产物的DNA序列，这种产物可以是蛋白质（大多数），也可以是RNA。编码产物将从合成地点扩散到其他场所起作用。基因产物自由扩散至其作用靶位的过程称反式作用（trans-acting）。 顺式作用（cis-acting）：不转变为其他任何形式（RNA或蛋白质）只以DNA形式在原来位置起作用的DNA序列，只影响与其临近的DNA序列。 二 乳糖操纵子 诱导 （一）乳糖操纵子(lac operon)的结构 弱启动子 调控区 CAP结合位点 启动序列 I基因 操纵序列 结构基因 Z： β-半乳糖苷酶 Y： β-半乳糖苷酶透性酶 A：β-半乳糖苷酶乙酰转移酶 Z Y A O P I DNA （一）乳糖操纵子(lac operon)的结构 β-半乳糖苷酶 透性酶 乙酰 转移酶 二 乳糖操纵子 诱导型 细菌对潜在的碳源有偏好，当存在葡萄糖时，其他糖类将不被利用。那乳糖操纵子平时是开还是关呢（假设大肠杆菌平时环境中葡萄糖更多） 结构基因簇受到其上游操纵基因lac O的调控，而 lac O与结构基因启动子具有部分重叠 mRNA 阻遏蛋白 I DNA Z Y A O P pol 没有乳糖存在时 阻遏蛋白的负性调节 阻遏基因 二 乳糖操纵子 诱导型 环境中没有葡萄糖，只有乳糖，细菌该怎么办呢 mRNA 阻遏蛋白 有乳糖存在时 I DNA Z Y A O P pol 启动转录 mRNA 乳糖 异乳糖 β-半乳糖苷酶 二 乳糖操纵子 诱导型 基因若 想表达 转录开始 诱导剂 半乳糖苷酶 基因得表达 没有乳糖时，ZYA只有几分子，但当出现乳糖时，几分钟内ZYA可以上千倍增多，可占蛋白质的10%。为什么不取个中间值？ ecoli需要竞争，哪怕1%的拥有也会影响。没乳糖全部关闭，尽力在环境中吸取G，相反需要的时候大量和成。 三个基因成蔟排