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待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物 颜色反应:分离特定的菌株; 牛奶平板:分离蛋白酶产生菌; 利用特定细菌的滑动特点进行 分离纯化; 2. 富集培养 从自然界中分离到所需的特定微生物 特定的环境条件 仅适应于该条件的微生物旺盛生长 待分离微生物在群落中的数量大大增加 富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理 条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特定微 生物的需要。 根据微生物的特殊要求,从自然界分离出特定已知微生物种类; 分离培养在特定环境中能生长的微生物; 六、二元培养物 培养物中只含有二种微生物,而且是有意识的 保持二者之间的特定关系的培养物称为二元培养物。 病毒和宿主细胞; 纤毛虫、变形虫和粘细菌; 第二节 显微镜和显微镜技术 一、显微镜的种类及原理 二、显微观察样品的制备 几个基本概念: 放大 分辨率 反差 被观察物越小,放大倍数应越大,否则难以看清! 能辨别两点之间最小距离的能力 被观察物区别于背景的程度 被观察物区别于背景的程度 与显微镜的自身特点有关,但也取决于进行显微观察时对显微 镜的正确使用及良好的标本制作和观察技术,这就是显微技术。 一、显微镜的种类及原理 1 普通光学显微镜 2 暗视野显微镜 3 相差显微镜 4 荧光显微镜 5 投射显微镜 6 扫描电子显微镜 7 扫描隧道显微镜 1 普通光学显微镜 光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少? 如何实现光学显微镜一般配置的最大放大倍数? 目镜:10 ~ 15 ╳;物镜: 100 ╳;总放大倍数1000~1500 ╳; 使用油镜,即在100 ╳物镜和载玻片之间滴加香柏油; 0.5 l 分辨率(最小可分辨距离)= ———— n sin q 分辨率与所用 波长成反比! θ为物镜镜口角的半数,它取决于物镜的直径和工作距离 N:玻片与物镜间介质的折射率 空气 (n=1.0)、水 (n=1.33)、 香柏油 (n=1.52)、玻璃 ( n=1.54) 显微观察时可根据 物镜的特性而选用不同的介质 二、显微观察样品的制备 1、光学显微镜的制样 (1)活体观察(看大体形态和运动情况) 压滴法 悬滴法 菌丝埋片法 因菌体小而无色透明,需借助颜色的反衬作用来 提高样品不同部位的反差。 (2)染色观察(看细致形态和主要结构) 简单染色法 正染色 革兰氏染色法 鉴别染色法 抗酸性染色法 芽孢染色法 死菌 姬姆萨染色法 负染色: 荚膜染色法等 细菌染色法 活菌:用美蓝或TTC(氧化三苯基四氮唑)等作活菌染色 2、电子显微镜的制样(略) 第三节 显微镜下的微生物 真细菌(Eubacteria) 即原核微生物 真核微生物 微生物 (病毒) 细菌(Bacteria) 古生菌(Archaea) 真菌(酵母、霉菌、蕈菌等)、 单细胞藻类、 原生动物等 非细胞型 细胞型 原核微生物 真核微生物(Eukarya) 细菌又称真细菌(eubacteria),包括普通细菌、放线菌、蓝细菌、 螺旋体、支原体、立克次氏体和衣原体等 古生菌在进化谱系上与真细菌及真核生物相互并列,且与后者关系 更近,而其细胞构造却与真细菌较为接近,同属于原核生物。 一、真细菌 球状 杆状 螺旋状 基本形态 1、球状 细胞个体呈球形或椭圆形,不同种的球菌在细胞分 裂时会形成不同的空间排列方式,常被作为分类依据。 金黄色葡萄球菌 淋病奈瑟氏球菌 肺炎链球菌 2、杆状 细胞呈杆状或圆柱形,一般其粗细(直径)比较稳定, 而长度则常因培养时间、培养条件不同而有较大变化。 杆状细菌的排列方式常因生长阶段和培养条件而发生 变化,
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