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HPLC测定片剂中富马酸福莫特罗 　　摘要：本文利用HPLC-ECD技术测定了市售片剂中富马酸福莫特罗的含量。实验结果表明，该化合物的线性范围为3.12×10-1～5.00×10μg?mL-1（r=0.9995）；回收率为99.0～107.8%（RSD≤4.6%）。该法可用于片剂中富马酸福莫特罗测定的研究。 　　关键词：HPLC；ECD；富马酸福莫特罗 　　中图分类号：R94 文献标识码：C 文章编号：1005-0515（2013）7-113-02 　　富马酸福莫特罗是一种长效β2-受体激动剂，临床上用于缓解由支气管哮喘、急性支气管炎、喘息性支气管炎或肺气肿等气道阻塞性疾病引起的呼吸困难等症状。目前，片剂中富马酸福莫特罗的检测方法以采用紫外检测器或二极管阵列检测器的液相色谱法为主[1-4]。本文将反相-高效液相色谱-电化学法检测（RP-HPLC-ECD）用于片剂中富马酸福莫特罗测定的研究。 　　1仪器与试剂 　　安科TCL-16C离心机；HP1100高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，二极管阵列检测器和电化学检测器，色谱数据通过HP工作站采集获得；DL-180型超声清洗器；IX-501型pH计；WG-2003台式干燥箱；Milli-QG超纯水制备仪。 　　富马酸福莫特罗购自美国Sigma公司，纯度均≥99%；甲醇为色谱纯；冰醋酸为分析纯；所用水为超纯水；盼得欣药片由天津力生制药股份有限公司生产。 　　2溶液制备 　　2.1对照品溶液的制备 　　准确称取富马酸福莫特罗对照品适量，置于25mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，振荡均匀后得富马酸福莫特罗（1.00×102μg?mL-1）单一对照品储备液。其它不同浓度的各对照品溶液由单一储备液混合稀释得到。 　　2.2供试品溶液的制备 　　称取适量散装盼得欣药片，研细，取其粉末0.0400g，精密称定，置于50mL锥形瓶中。然后，准确加入甲醇25.00mL，称定其重量。用频率为35±5%KHz，功率为180W超声仪超声10min，取出，放冷后，再称定重量，然后用甲醇补足减失的重量，振荡均匀。取出3mL溶液于5mL离心管中，3000r?min-1离心5min，吸取上清液并用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。盼得欣供试品溶液的制备同上。 　　3色谱条件 　　采用长度为150mm、外径为4.6mm和内径为5.0?m的ZorbaxSB-C18色谱柱；流动相包括（A）甲醇、（B）水-冰醋酸（pH=3.00）。采用梯度洗脱，其洗脱程序如下：0min时A-B（10：90），10min时A-B（40：60），流速为1.0mL?min-1；ECD的工作电位为1.0V，柱温为30℃。按上述条件获得的对照品（A）和样品（B）的色谱图见图1。富马酸福莫特罗的保留时间为10.98min。 　　4实验与结果 　　4.1线性关系考察 　　准确移取“2溶液制备”中“2.1”项下所配制的一定体积的富马酸福莫特罗对照品储备液于10mL量瓶中，用甲醇定容，配制富马酸福莫特罗浓度分别为3.12×10-1，6.25×10-1，3.12，6.25，1.25×10，5.00×10μg?mL-1的系列混合对照品溶液，用0.45μm的微孔滤膜滤过。取此对照品溶液10.0μL，按“3”项所述色谱条件进样，平行测定3次，以平均峰面积积分值Y对浓度C（μg?mL-1）进行线性回归，获得富马酸福莫特罗的回归方程。其相关参数、相关系数、线性范围见表1。结果表明：富马酸福莫特罗在3.1×10-1～5.0×10μg?mL-1范围内，线性关系良好。 　　表1 两种化合物的回归方程相关参数和线性范围（n=3） 　　4.2加样回收率实验 　　准确称取已知含量的盼得欣粉末9份，每份30mg。将其分别置于25mL量瓶中，每3份为1组。往三组盼得欣样品中，分别准确加入浓度为1.0×102μg?mL-1的富马酸福莫特罗对照品溶液1.6mL，0.6mL和0.1mL。按照“2溶液制备”中“2.2”项所述方法制备溶液后，按照本实验中所描述的色谱条件进样，进样量10.0μL，重复进样3次，采用外标法计算加入对照品后供试品溶液中富马酸福莫特罗的含量，三种不同浓度的加样回收率及相对标准偏差（表2）。 　　4.3精密度、重复性和稳定性实验 　　精密量取“2溶液制备”中“2.1”项下所配制的一定体积的富马酸福莫特罗对照品储备液于10mL量瓶中，用甲醇定容，配制成相应的对照品溶液，用0.45μm的微孔滤膜滤过。按照本实验中所描述的对照品溶液的制备方法和所选择的色谱条件进样，连续测定6次，每次10.0μL，计算富马酸福莫特罗的含量的RSD分别为4.1%。 　　准确称取盼得欣片剂粉末（0.0300g）各5份，按照“2溶液制备”中