生化分离工程总结复习2016.01.08分析.doc

生化分离工程（bioseparation engineering） 通过微生物发酵过程、酶反应过程或动植物细胞大量培养获得生物化工产品，从上述发酵液、反应液或培养液中分离、精制有关产品的过程即称为生化分离工程或称下游加工过程(downstream processing）。 上游：菌种，基因工程，分子生物学，遗传学 中游：微生物发酵工程，动植物细胞培养， 海洋生物培养 下游：生物分离工程 生物分离过程的一般流程 生物分离工艺要求： (1) 高纯度(2) 大规模(3) 经济性(4) 生物相容性 对产物的要求： 保持生物产物的活性；纯度要求高 当生物技术产品是食品或药物时，要求无污染物、无对映体、无病毒、无热原无致敏原。 从发酵液和细胞培养液中提取所需生化物质的第一步，分两部分：预处理和固液分离 发酵液预处理的原因： 液相粘度大，大多为非牛顿型流体，不易过滤，所需物质多在液相。 发酵产物浓度较低，大多为1-10%， 发酵液成分复杂，不利于提取产物 预处理的目的 促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率： ⑴ 改变发酵液的物理性质，包括增大悬浮液中固体粒 子的尺寸，降低液体黏度。 ⑵ 相对纯化，去除发酵液中的部分杂质（高价无机离 子和杂蛋白质），以利于后续各步操作。 ⑶ 尽可能使产物转移进入便于后处理的一相中（多数是液相）； 发酵液杂质的去除： 不同杂质的去除方法：发酵液成分复杂，目标产物与各种杂质溶解在一起。这些杂质中对提取影响最大的是高价无机离子和杂蛋白。 无机离子的去除：钙离子，在发酵液中加入草酸，可出去钙离子。镁离子，由于发酵液中镁离子含量通常不高，利用草酸很难完全出去镁离子。此时，可加入三聚磷酸钠，三聚磷酸钠与镁离子形成可溶性络合物，即可除去镁离子。铁离子，发酵液中的铁离子，一般用黄血岩去除，使其形成普鲁士蓝沉淀。 可溶性蛋白质的去除：①盐析法②等点沉淀法③有机溶剂沉淀法④其他沉淀法⑤加热法⑥吸附法 蛋白质盐析常用的中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。 其中应用最多的硫酸铵 影响盐析的因素有：（1）温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4度）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶解度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25度）比0度时溶解度低，更容易盐析。（2）pH值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶解度最低。（3）蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%。 沉淀法： 等电点沉淀法 （isoelectric precipitation ） 蛋白质的等电点大都在酸性范围内(pH4.0～5.5)，调节发酵液的pH到蛋白质的等电点是除去蛋白质的有效方法。 酸碱调节，使蛋白质与离子形成沉淀 在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子形成沉淀，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐等； 在碱性溶液中，蛋白质与一些阳离子形成沉淀， 如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+等。 变性法 Denaturation A. 加热， B. 大幅度调节pH值， C. 加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂等。 有色物质的去除：通常脱色方法为吸附法，如活性炭吸附和树脂吸附。 常用的脱色方法为吸附法： 活性炭吸附（活性炭是一种主要由含碳材料制成的外观呈黑色，内部孔隙结构发达、比表面积大、吸附能力强的一类微晶质碳素材料。活性炭材料中有大量肉眼看不见的微孔，1克活性炭材料中微孔，将其展开后表面积可高达800－1500平方米，特殊用途的更高。也就是说，在一个米粒大小的活性炭颗粒中，微孔的内表面积可能相当于一个客厅面积的大小。正是这些高度发达，如人体毛细血管般的孔隙结构，使活性炭拥有了优良的吸附性能。 ）、 树脂吸附（脱色树脂） 2.4 发酵液性能的改善： 2.4.1 降低发酵液的粘度 方法： 加热（温度和时间）和稀释。 麦芽汁40℃-75 ℃ ，粘度下降50%。 2.4.2 调解pH 蛋白、氨基酸等电点—沉淀；减少膜的堵塞；利于细胞、细胞碎片和胶体的絮凝 2.5 凝聚和絮凝技术 凝聚和絮凝技术常用于菌体细小而且黏度大的发酵液的预处理中。 絮凝与凝聚：①絮凝是指在某些高分子絮凝剂的存在下，基于桥架作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理的集合为主的过程。②凝聚是指在中性盐的作用下，由于双电层排斥电位的降低，而使胶体体系不稳定的现象。 工业上使用的絮凝剂可分为三类： 1）人工合成有机高分子聚合物、 2）天然有机高分子聚合物、 2