课题3血红蛋白的提取和分离要点.pptVIP

课堂练习 1、随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是 A 弄清各种蛋白质的空间结构 B 弄清各种蛋白质的功能 C 弄清各种蛋白质的合成过程 D 获得高纯度的蛋白质 2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是 A 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B 相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D 二者根本无法比较 3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于 A 电荷的多少 B 分子的大小 C 肽链的多少 D 分子形状的差异 4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是 A 调节pH B 维持红细胞的能量供应 C 防止微生物生长 D 防止血液凝固 课题3 血红蛋白的提取和分离 专题5 DNA和蛋白质技术 课题目标 1、尝试血红蛋白的提取和分离。 2、了解从复杂体系中提取生物大分子的过程及方法。 3、了解色谱法、电泳法分离生物大分子的基本原理。 课题重点 凝胶色谱法的原理和方法 课题难点 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？ 用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质。 思考3 高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质 的何种作用，作用结果是什么被破坏？ 变性、变性、空间结构 思考4 人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取，人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富便于提取血红蛋白。 一、基础知识： （一）凝胶色谱法（分配色谱法）： 2、凝胶： 一些微小多孔的球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖） 1、概念： 根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法 3、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相对（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 4、具体过程 分子质量较小 较长 较慢 相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 1、概念： 在一定的范围内，能对抗外来少量酸或碱而不引起溶液PH发生明显变化的作用叫做缓冲作用，具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液。 （二） 缓冲溶液： 2、作用： 对抗外来少量酸或碱对溶液PH的影响，维持PH基本不变。 3、缓冲溶液的配制 通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。 人体血液中有哪些缓冲液？ NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 在血红蛋白整个实验中用的缓冲液是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究（活性） 为什么在本实验中使用缓冲溶液？ （三）电泳： 1、概念： 指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2、原理： 许多生物大分子，都有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度从而实现样品中各种分子的分离。 3、分类： 琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。 测定蛋白质相对分子质量通常用十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳 电泳检测结果 琼脂糖凝胶电泳 （四）血红蛋白 在红细胞的组成中，约90%是血红蛋白。它由四个肽链组成，包括两个α—肽链和两个β—肽链。每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，可携带一分子氧或一分子二氧化碳。血红蛋白因含血红素而呈现红色。 二、实验操作 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 血液 血浆 水分 固体物质 血浆蛋白 无机盐 磷脂 葡萄糖等 血细胞 白细胞 血小板 红细胞 （最多） 血红蛋白 （ ） 两个a－肽链 两个β一肽链 样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定 共四条肽链 90％ （一）样品处理 1、红细胞的洗涤； 2、血红蛋白的释放； 3、分离血红蛋白溶液； 1.洗 涤 红 细 胞 血液 100mL 3g柠檬酸钠 低速离心 2 min 红细胞 血 浆 吸出血浆 红细胞 5倍体积生理盐水 搅拌10min 重复洗涤3次，直至