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- 2018-06-12 发布于贵州
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环境工程微生物重点
作业部分:
作业1
叙述革兰氏染色的机制和步骤。
答:1884年丹麦细菌学家Christain Gram创立了革兰氏染色法。将一大类细菌染上色,而
另一类染不上色,一边将两大类细菌分开,作为分类鉴定重要的第一步。革兰氏染色的机制有如下两点:
(1)革兰氏染色与细菌等电点有关系:革兰氏阳性菌带的负电荷比革兰氏阴性菌多。它与草酸铵结晶紫的结合力大,用碘—碘化钾媒染后,两者的等电点均得到降低,但革兰氏阳性菌的等电点降低得多,故与草酸铵结晶紫结合得更牢固,对乙醇脱色的抵抗力更强。草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物不被乙醇提取,菌体呈紫色。而革兰氏阴性菌与草酸铵结晶紫的结合力弱,草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物很容易被乙醇提取而使菌体呈无色。
(2)革兰氏染色与细胞壁有关系:革兰氏阳性菌的脂质含量很低,肽聚糖的含量高。阴性菌相反,因此用乙醇脱色时,革兰氏阴性菌的脂质被乙醇溶解,增加细菌细胞壁的孔径及其通透性,乙醇很容易进入细胞内将草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物提取出来,使菌体呈无色。革兰氏阳性菌由于脂质含量极低,而肽聚糖含量高,乙醇既是脱色剂又是脱水剂,使肽聚糖脱水缩小细胞壁的孔径,降低细胞壁的通透性,阻止乙醇分子进入细胞,草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物被截留在细胞内而不被脱色,仍呈现紫色。
染色步骤如下:
1在无菌操作条件下,用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀,固定。
2用草酸铵结晶
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