层析岗位操作规则.docVIP

层析岗位操作规程 目的：建立层析上样岗位操作规程，规范岗位操作。 范围：适用于层析上样岗位。 职责：层析上样操作人员。 内容： 准备工作 检查层析柱、中转桶、脱盐罐、超滤器是否处于备用或已安装。 检查设备是否已清洁。 溶液的配置 平衡液：称取12000-12100g Tris，溶于5000L低温纯化水中，开搅拌，当缓冲液温度≤8℃时，再用盐酸调PH至9.05-9.35。 洗脱液：称取50000-50100g氯化钠,溶于5000L已配置好的平衡缓冲液中，开启搅拌，将溶液温度控制在0-4℃左右。 上样液：脱盐罐内体积、电导合格后，打开平衡液进料阀将体积补加到500±20升，再用5M 氢氧化钠调PH至9.05-9.35，取样检测物料的蛋白含量及其活性。配制好的上样液电导值应不高于1100μs/cm，保持上样液的温度在0-8℃。 上样 打开层析柱平衡液进液阀，层析柱出液阀，打开平衡液中转泵电源开关，平衡液冲洗柱床约3个体积，流速2.5-3.0L/min流出液检测、PH值9.05-9.35， 平衡结束后，关闭层析柱平衡液进料阀，平衡液中转泵，打开层析柱上样液进料阀，上样液中转泵电源开关，开始上样，流速2.5-3.0L/min。上样液经层析柱分离，流出液每160-200升检测蛋白含量和胰、糜蛋白酶活性。上样过程中及时调穿柱峰的pH值为2.0-3.0。 上样全部泵入层析柱后,关闭上样液进料阀，关闭上样液中转泵电源开关，打开层析柱平衡液进液阀，打开平衡液中转泵电源开关，继续用平衡液冲洗柱床，流速2.5-3.0L/min, 收集流出液, 检测流出液蛋白含量小于1mg/ml时停止收集，按实际流速计算时间冲洗250升平衡液。 洗柱结束后, 关闭层析柱平衡液进料阀，平衡液中转泵，打开层析柱洗脱液进液阀，打开洗脱液中转泵开关，用洗脱液冲洗柱床,流速2.5-3.0L/min,收集洗脱流出液同时取样检测蛋白含量和胰、糜蛋白酶活性洗脱液蛋白低于1mg/ml时停止洗脱和洗脱液收集，洗脱过程中及时调洗脱峰的pH值为2.0-3.0。 浓缩脱盐 收集的穿柱峰，使用蠕动泵中转到浓缩罐内，打开浓缩罐罐底阀门；打开超滤器进液阀门；打开超滤器回流阀门和废液阀门，开启超滤器进料泵电源开关，通过控制超滤器回流阀门开关将压力控制在0.05-0.1Mpa之间，检测废液排除蛋白含量在5mg/ml以下，否则检测超滤器心是否泄漏。废液通过管道排放到下水道。 当浓缩罐内浓缩液蛋白含量达到50-60mg/ml浓缩完成，将回流阀门回流到中专桶内，为胰蛋白酶冻干液。 收集的洗脱峰，使用蠕动泵中转到浓缩罐内，打开浓缩罐罐底阀门；打开超滤器进液阀门；打开超滤器回流阀门和废液阀门，开启超滤器进料泵电源开关，通过控制超滤器回流阀门开关将压力控制在0.05-0.1Mpa之间，检测废液排除蛋白含量在5mg/ml以下，否则检测超滤器心是否泄漏。废液通过管道排放到下水道。当脱盐罐内体积在80-120升时检测电导率，打开脱盐罐脱盐液进料阀门，加入脱盐液180-220升。 重复上一步，当电导率低于1200us/cm时，控制体积在80-120升完成，将回流阀门回流到中专桶内，为糜蛋白酶冻干液。 将胰冻干液于糜冻干液与冻干进料人员交接。