wl1.1 DNA重组技术的基本工具.pptVIP

　 　 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 小结 3、种类： 1、需要具备的条件（你觉得呢？） （1）在受体细胞中稳定存在，能自我复制 （2）有一个或多个切割位点 （3）有标记基因 （4）对受体细胞无害 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒等 2、载体的作用 使外源基因在受体细胞中稳定存在和复制。 基本工具之三 运载体 最常用的质粒——大肠杆菌的质粒 试分析其作为载体的优点？ 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工 具 具备的条件 种类：质粒、 动植物病毒等 * 选修三 现代生物科技专题 专题一 基因工程 专题二 细胞工程 专题三 胚胎工程 专题四 生物技术的安全性和伦理问题 专题五 生态工程 选修三 现代生物科技专题 专题一 什么叫基因工程？ 基因工程，又叫DNA重组技术。是指按照人们的愿望，在DNA分子水平上进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程的概念 优点： ⑴ 定向改造生物性状 ⑵ 克服远缘杂交不亲和的障碍 ⑶ 育种周期短 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基本工具之一 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 来源： 主要从原核生物中分离纯化出来。（why？） 种类： 已分离出4000种限制酶。（够不够任性？） 作用： 1.能识别双链DNA的某种特定核苷酸序列 2.使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 还有个好记的小名\(^o^)/：限制酶 磷酸二酯键 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 识别特定序列： 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列， 并且能在特定的切点上切割DNA分子。 （这体现了酶的什么特点？） 来看看限制酶的特异性识别序列是个什么样子： 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少 数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 限制酶的识别序列 回文结构哦（⊙o⊙ ） 回文结构 EcoRI 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 来，看几个限制酶的例子哈 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割： 黏性末端 黏性末端 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 C C C G G G G G G C C C SmaI限制酶的切割： 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaⅠ 平末端　　　平末端 C C C G G G G G G C C C SmaI限制酶的切割： 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 C C C G G G G G G C C C C C C G G G G G G C C C SmaI限制酶的切割： 只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 C C C G G G G G G C C C 平末端 平末端 限制酶的作用结果： 产生黏性末端或平末端。 你能推测限制酶存在于原核生物中的作用吗？P4 原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物 在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机 制，以防止外来病原物的侵害。限制酶就是细 菌的一种防御性工具，当外源DNA侵入时，会 利用限制酶将外源DNA切割掉，以保证自身的 安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切 割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的 目的。 ①作用 “分子缝合针”——DNA连接酶 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱 氧核糖和磷酸连接起来. ②作用原理 催化磷酸二酯键形成 基本工具之二 G A A T T C C T T A A G A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G ③类型 二 “分子缝合针”——DNA连接酶 类型 来源 功能 相同点 差别 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 磷酸二酯键 T4 DNA连接酶 T4DNA连接