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第十章 核酸的生物合成 核酸是最基本的生物遗传物质，是所有生命最基本的组成成分之一。核酸在体内是如何复制和转录的？即遗传物质是如何从亲代传到子代的，这个重要的问题，曾经长期使科学家们困惑不解。 1953年4月25日，J.Watson和F.Crick在英国《Nature》杂志上发表了一篇著名论文，建立了DNA双螺旋结构模型，该模型阐述了DNA的分子结构，使人们第一次从分子水平认识了DNA，现在，人们已经认识到DNA是生物遗传的物质基础，基因是DNA分子中具有生物学功能的片段。不同基因有不同的碱基(或核苷酸)序列，携带着不同的遗传信息。在细胞有丝分裂之前，细胞中的DNA进行复制（DNA replication）。DNA复制是以亲代DNA为模板，按照碱基互补原则合成子代DNA，形成碱基序列相同的两个子代DNA双螺旋分子，在细胞分裂时将遗传信息分配到子代细胞中，从而使亲代DNA传递给子代DNA的。 同时，DNA是遗传信息分子，分子中的遗传信息通过指导蛋白质合成体现出来。但DNA本身并不直接指导蛋白质的合成，而是通过转录合成RNA来实现。转录（transcription）是指以DNA分子的单链为模板，合成与其互补的RNA分子，同时将DNA的遗传信息传递给RNA的过程。转录合成的信使RNA可以作为模板合成蛋白质，这一过程称为翻译（translation）。复制使基因的遗传信息从亲代DNA传给子代DNA；转录和翻译使基因的遗传信息整合到了各种有功能的蛋白质分子中。遗传信息从DNA到DNA再到蛋白质的这种传递规律称为遗传信息传递的中心法则（图10-1）。 图10-1 遗传信息传递的中心法则 遗传信息通过复制、转录、翻译而整合到蛋白质分子中，此信息的传递规律为中心法则的经典内容。此外，人类、某些病毒的RNA也可作为模板，指导DNA的合成，这种信息传递方向与转录过程相反，称为逆转录(reverse transcription) ，或称反转录。有些病毒中的RNA还可作为模板复制产生RNA，这称为RNA的自身复制。这些特殊情况使中心法则得到了完善和补充。 第一节 DNA复制 DNA生物合成的方式主要包括DNA复制和逆转录，DNA复制是体内合成DNA的主要方式。此外，在DNA分子损伤后，体内可通过特殊的修复机制对DNA进行修补合成以保持DNA的稳定。 一、DNA的复制 （一）DNA复制的方式 DNA复制的方式为半保留复制（semi-conservative replication）。在半保留复制中，首先DNA双链间的氢键断裂，解开成两股单链。然后，每条单链DNA各自作为模板，以三磷酸脱氧核糖核苷（dNTP）为原料，按照A与T、G与C的碱基配对规律，合成新的互补链，形成两个与亲代DNA分子的核苷酸顺序完全相同的子代DNA分子。在合成的每个子代DNA分子的双链中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式称为半保留复制（图10-2）。DNA碱基配对规律决定了合成的子代DNA与亲代DNA完全相同，故DNA半保留复制能充分保证DNA代谢稳定性与复制忠实性。 1958年Meselson和Stahl利用氮标记技术在大肠杆菌中首次证实了DNA的半保留复制，他们将大肠杆菌放在含有15N标记的NH4Cl培养基中繁殖了15代，使所有的大肠杆菌DNA被15N所标记。然后将细菌转移到含有14N标记的NH4Cl培养基中进行培养，在培养代时，收集，用氯化铯(CsCl)密度梯度离心法观察DNA所处的位置。由于15N-DNA的密度比普通DNA(14N－DNA)的密度大，在氯化铯密度梯度离心(density gradient centrifugation)时，两种密度不同的DNA分布在不同的区带。生物学最美丽的实验） 图10-3 拓扑结构示意图 图10-4 拓扑异构酶作用示意图 （3）单链DNA结合蛋白 DNA双链解开之后，DNA结合蛋白（single strand DNA binding protein，SSB）结合在解开的单股DNA链上，维持模板链于单链状态，同时保护单股DNA链不被核酸酶水解。 （4）引物酶 DNA复制不是自行从头以2个游离的单脱氧核苷酸为起点聚合合成DNA的，而是首先合成一小段RNA链作为引物（primer），催化RNA引物合成的酶称为引物酶（primase）。引物酶是一种特殊的RNA聚合酶，它以4种NTP为原料，以解开的DNA链为模板，按5’→3’方向合成短片段的RNA作为引物。 （5）DNA聚合酶 DNA聚合酶是复制中的最重要酶，又称为DNA依赖的DNA聚合酶（DNA dependent DNA polymerase，DDDP），它能催化四种dNTP通过与