分子生物学技术在生药鉴定中的应用分析.docVIP

分子生物学技术在生药鉴定中的应用 摘要：生药的准确鉴定涉及到人民生命安全和切身利益。传统的鉴定方法，即感官评价、显微鉴定和理化鉴定均存在不同程度的局限性，而分子鉴定则为生药的快速和准确鉴定带来了新的契机。分子生物学技术在生药领域已得到广泛应用，并对生药新药研究产生了深刻的影响。本文主要介绍了蛋白质电泳技术、PCR技术、RFLP技术、DNA测序技术、DNA条形码技术、RAPD技术、DNA芯片技术在生药鉴定中的应用。 关键词：分子生物 生药鉴定 快速 准确 PCR RAPD 中医中药是中华民族传统文化中的瑰宝 ,曾经在我国人民的医疗健康中占主导地位。由于我国材资源丰富,药用动植物达1万余种[1];另一方面,药材来源复杂,品种划分混乱。传统的鉴定手段有形态分类、解剖学特征以及理化鉴别。许多药材外形类似 ,经过加工后容易改变形态结构。因此,在材市场上,以次充好、以假乱真现象严重。如何保证药材纯正面临巨大的挑战,材品质鉴定已成为质量控制的首要环节。 　　近年来,不少新的技术如分子生物学技术、超微结构和微形态学研究、光谱学方法、X射线衍射法、差热分析法和以 HPLC为代表的色谱技术等均大量用于材品质鉴定中,其中分子生物学技术以其准确性高、重现性好等特点尤为引人瞩目。 1传统鉴定 的传统鉴定是利用植物或动物形态分类学和解剖学特征，从基原、性状、显微特征、理化等方面进行药材鉴别。大部分药材经加工、炮制等处理后，往往失去了原来的形态和解剖特征，甚至显微特征也会发生改变，从而使药材的真伪优劣难以鉴别，特别是对一些故意造假、以次充好的药材更是难以鉴别。因此假劣药材、混淆品充斥材市场的状况一直未能得到根本改善。复方制剂也难以通过传统的形态鉴别方法来鉴别。近年来，分子生物学技术的应用，使材鉴别从器官水平提高到细胞水平和分子水平。 2蛋白质电泳技术 生物样品中富含蛋白质分子,各种分子电荷性质、电荷数和分子量各不相同,在同一电场作用下,一定时间内各组分泳动的方向、速度和距离也不相同,结合谱带条数和染色不同可以达到鉴别的目的。蛋白质电泳技术简单实用被较早地应用于材鉴别中。 2.1蛋白质电泳技术在植物性药材鉴定中的应用 在植物性药材方面,蛋白质电泳技术在种子类药材的鉴别中得到了较多应用。石俊英等[2]较早运用聚丙烯酰胺凝胶电泳 polyacrylamidegel electrophoresis , PAGE 技术对青箱子、沙苑子、小菌香、苍耳子与伪混品等数十种药材进行分析。结果表明:不同种药材的蛋白PAGE图谱差异显著,并具有各自的鉴别特征带。陈振德等[3]对国产榧属植物种子的蛋白进行了高效毛细管电泳分析,利用电泳图谱区分了榧子、云南榧子等7种榧子,可作为中药榧子的鉴别方法之一。蛋白质电泳技术在非种子类药材的鉴定中也有报道。许重远等[4]采取高效毛细管电泳技术对生药狗脊、制狗脊及其混淆品黑狗脊的酸性、中性、碱性三种提取液分别进行蛋白多肽电泳检测,黑狗脊与狗脊在三种提取液检测所得图谱中都存在显著差异,生狗脊与制狗脊也可从酸性提取液的图谱中加以区别。 2.2蛋白质电泳技术在动物性药材鉴定中的应用 蛋白质电泳技术在动物类药材鉴定方面也有不少报道。张林碧[5]用此法对家鸡、斑鸠、孔雀、白鹇、鸽等5种鸟类的内金进行了 PAGE 图谱、薄层扫描图谱的比较,不同种鸟类内金的PAGE图谱及其薄层扫描图谱差异明显,可作为内金类药材的鉴别依据。蜥蜴常被用来冒充壁虎,李国锐等[6]利用SDS - PAGE技术对蜥蜴和壁虎躯体各部分的蛋白图谱分别进行研究,各部分图谱均能有效鉴别两种动物。 蛋白电泳应用较早,较为快捷,但生物体蛋白的种类和数量在生物生长发育周期中变化较大,各组织器官也不相同,且样品内蛋白的降解程度也会影响结果,国内采用电泳方法过于单一,不同电泳方法及不同条件下提取蛋白方法的影响因素等极少同时观察,而对未知品种鉴别,仅靠一种电泳谱难以客观评价,因此难以建立标准化图谱,其应用受到了限制。 3 DNA分子鉴定 DNA分子作为生物遗传信息的直接载体，同种药用植物或动物的每一个体的所有细胞均包含相同的遗传信息，具有相同的遗传物质DNA，它不受气候、土壤等环境影响，也不会随个体发育阶段或因组织器官的不同而不同。因此DNA分子标记技术为鉴别原植物或动物形态已遭到破坏的药材的鉴别提供了新的技术途径。 基于聚合酶链反应 PCR 的鉴别：基于PCR的鉴别方法有随机扩增多态性DNA RAPD 、任意引物聚合酶链反应 AP-PCR 、微卫星DNA等。如黄璐琦等[]应用 RAPD技术对来源于13个种3个变种的天花粉及其类似品，用8个引物分别扩增，得到了清晰、稳定的83条条带，通过聚类分析，把天花粉正品与类似品有效地分成3大类。曹晖等[]采用AP-PCR和RAPD方法扩增地胆草、白花地胆草和