无菌方法-ISO11737-2.docVIP

6.无菌试验方法 6.1 基本上无菌试验有两种方法。a 产品直接浸入培养基或者在产品中添加培养基，然后培养。b 从产品上取出微生物，把取出的微生物转移到培养基里面，然后开始培养。 6.2 对于被鉴定的产品，需考虑并记录影响无菌试验方法设计的因素。需考虑的因素至少应包括 a 在标签上需注明产品哪些部分是无菌的。 b 检测产品的物理和（或）化学性质。（见6.6） c 污染微生物的可能的品种和微生物在产品上/里的位置。 6.3 无菌试验中，执行可能会影响测试结果的操作时，应用无菌技术。 6.4 如果通过洗脱液把微生物取出，然后再转移到培养基，需考虑以下因素： a 恰当的洗脱液的选择。 b 有效转移污染微生物洗脱技术的能力（参照 如：ISO11737-1中7.2部分） c 洗脱技术对污染微生物存活能力的影响。 6.5 如果微生物从洗脱液或者经过滤后的液体产品中提取，然后转移到培养基中，需考虑以下因素： a 选择有效的过滤系统 b 选择恰当的液体漂洗容器，选择恰当的过滤器和辅助设备（如果有需要）。 6.6 如果被检测的产品的物理或化学性质是一种可能存在或可能不利微生物繁殖的物质，就使用中和去除的方法。或者，如果不可能是用这种方法，那么就把使用这类物质的影响降到最低。这样的一种方法需得到论证。 6.7 根据出现的微生物的种类选择培养条件。获得的考虑结果和决定方案的基本原理都应该记录下来（见4.12）。 6.8 产品暴露于灭菌介质和开始对产品进行无菌试验的时间间隔应尽可能缩短。 6.9 然后进行培养，检查培养基，收集微生物生长迹象。记录检查结果。（见4.1.2） 7. 无菌试验方法评估 运用无菌试验结果之前，需要评估所选方法的恰当性，并记录评估结果。（见4.1.2）。 8 无菌试验方法的维护 8.1 审查产品和（或）制造过程的修正，确定是否需要改变无菌试验方法。如果审查后指明需要改变，就需要实施第六条所给出的要求。 8.2 评估无菌试验方法的修正，确定试验方法持久恰当的效果。记录评估结果（见4.1.2）。 附页内容 A.6 无菌试验方法 A.6.1 第六条中指出，无菌试验方法基本上分为两类，就是上述描述的a 和b . a 产品的直接浸入法：直接浸入法是在医疗器材无菌试验中的首选方法。直接浸入的方法就是把产品或样品项目分割无菌放置入一个带有培养基的容器中（或多个容器中，见A.5.2.1），然后开始培养。使用充足的培养基，让培养基和整个产品或样品项目分割充分接触。此外，还需要考虑以下因素： — 置于灭菌介质前分解（见A.5.3） 浸入培养基之前分解和（或）操作 放置入培养基之后搅拌 为了改善产品表面的润湿程度，在培养基中添加表面活性成分（表面活性成分需被证实不含抑制微生物的成分） 培养期间，保持培养接和产品或样品项目分割的接触。 对产品的流体通道进行无菌试验，流体通道需要填充满培养基，然后在开始培养。 b 从产品上转移微生物：由于医疗器材的特性（如抑制细菌繁殖的/抑制真菌的），有些产品不可能使用直接浸入法，就必须要使用从产品上转移微生物的方法。 使用这个工艺的时候，要特别当心。这个工艺可能不会把产品上所有的微生物都洗脱出来。如果没有办法把产品上所有微生物都洗脱出来，那么就会导致试验无效。在关联操作过程中，污染的发生可能会导致假阳性的出现。 把微生物转移到培养环境前，用物理方法把产品上的微生物取出的过程依次又可以进一步细分为： 洗脱和薄膜过滤 洗脱和洗脱液的培植 以上两个细分步骤的前提是把微生物从产品或样品项目分割取出。使用的工艺和生物负载的测定一样。生物负载的测定在ISO11737-1:2006中B.2.2已经描述过了。类似的，选择合适的洗脱液的注意事项也和生物负载测定中提及的一样。生物负载测定的注意事项在ISO11737-1:2006表格B.1和B.2.3已经描述过了。 微生物一旦从产品或样品项目分割取出，就可能使用薄膜过滤或全部洗脱液培植来进行无菌试验。 A.6.2 无指引。 A.6.3 适用于无菌试验的无菌工艺包括以下方面： — 在受控环境中进行试验 例如： 层流净化罩和生物安全柜指定安放在受控环境房间，屏障隔离。 灭菌所有设备，材料和在试验中所用到的项目。 引进试验器具，培养基和试验样品，无菌置于检测区域。 把测试样品引进测试区域前，净化外包装。 净化测试区域表面 把要求的无菌试验的操作步骤降到最低 无菌工艺执行培训。 A.6.4 通过培养洗脱液进行无菌试验，一种方法是把培养基作为洗脱液，经过洗脱后，把洗脱液转移到无菌的容器中，然后进行培养。 另一种方法是使用不会促进微生物生长的洗脱液，经过洗脱之后，在无菌容器中，洗脱液要与同等体积双倍强度的培养基混合，然后进行培养。两种方法择其一。如果洗脱液的体积小于或者等于培养基体积的10