分子生物学实验告(2010版).docVIP

（20 -20 学年第 学期） 姓名____________________ 班级____________________ 学号____________________ 实验项目 成绩 实验准备 实验一：大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 实验二：大肠杆菌质粒DNA的提取 实验三：琼脂糖凝胶电泳 实验四：大肠杆菌基因组DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳 实验五：质粒DNA限制性内切酶实验及琼脂糖凝胶电泳 实验六：聚合酶链式反应（PCR）扩增目的基因及琼脂糖凝胶电泳 总评成绩________________ 指导教师________________ 实验时间__________年______月______日 一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器与材料 四、实验步骤 五、实验结果与分析 思考题： 1、碱法提取质粒DNA时应注意哪些问题？溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用分别是什么？ 溶液Ⅰ：50mmol/L葡萄糖，25mmol/L Tris·Cl（pH8.0），10mmol/L EDTA（pH8.0）。 溶液Ⅱ：0.2mol/L NaOH，1%SDS。 溶液Ⅲ：5mol/L KAc 60mL，冰醋酸11.5mL，H2O 28.5mL，定容至100mL。 2、描述质粒DNA电泳图谱，并解释可能产生的现象及原因。 实验时间__________年______月______日 一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器与材料 四、实验步骤 思考题： 1、DNA在琼脂糖凝胶中的电泳迁移速率的影响因素有哪些？ 2、试说明琼脂糖凝胶电泳与你在生化实验中所学的聚丙烯酰胺凝胶电泳有何区别。 实验时间__________年______月______日 一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器与材料 四、实验步骤 五、实验结果与分析 思考题： 1、重组实验中常用的酶有哪几类？分别起什么作用？ 2、利用限制性内切酶消化DNA时应注意哪些问题？为什么酶的使用量一般不能超过反应体系总体积的10%？如果酶加的过多会造成什么后果？ 3、DNA酶切反应不彻底的电泳图谱是怎么样的？DNA若发生降解，酶切图谱又如何？ 实验时间__________年______月______日 一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器与材料 四、实验步骤 五、实验结果与分析 思考题： 1、降低退火温度对PCR结果有何影响？延长变性时间对PCR结果有何影响？循环次数是否越多越好？为什么？ 2、试分析没有PCR产物生成的可能原因。 3、在PCR产物分析时发现，除了目的产物带外，还存在其他的非目的产物条带，试分析产生该现象的原因并提出改进的方法。 4、获得了预期的单一目的条带，但产量较低，可能的原因有哪些？ center pin checks and anchoring the inner cylinder. According to While coupling alignment should keep oil out of cavity and locate the rotor axis neck raised are within the prescribed limits, there should be no gaps, Horn, Horn and Horn 0.05mm feeler gauges fit into. Center coupling, condenser water filling and water-filled according to factory requirement. For coupling three supported rotor Center, the mouth under the coupling between the value should be as stipulated in the manufacturer, usually 0.15~0.25mm. In the case of coupling connection, if possible, lifting only one bearing end of the support bearing of the rotor, remove the bearing, fitted with special tiles and special lifting tools, disc rotors, check the journal flutter tile, should generally be less than 0.10MM. When the couplings and rotor comes when there is a conflict,