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综合性实验项目指导书 《微生物工程》 编写单位： 生命科学学院 编写教师： 闫训友 适用专业： 生物技术 编写日期： 2011.5.10 综合性实验项目名称（黑体，四号，全文1.5倍行距） 一、实验项目：液体培养阿魏侧耳发酵液动态变化 实验学时：8学时 实验类型：（综合） 每组人数： 5 人/组 二、实验目的及要求 通过本实验的学习，使学生学会液体培养阿魏侧耳的原理和方法，掌握液体培养条件下的无菌技术，掌握液体培养条件下各因子的动态变化，掌握发酵终点的判断及污染处理，为今后从事于微生物发酵奠定基础。） 三、实验主要仪器和制剂 主要仪器：恒温振荡器、超净工作台、高压灭菌锅、分析天平、电磁炉、分光光度计、移液管等。 试剂：蒽酮试剂、3,5-二硝基水杨酸、PDA液体培养基、平菇等 四、实验内容（一级标题：黑体，小四号。下同） 配制PDA液体培养基，选择长势良好的菌丝，无菌操作挑取数片菌丝，接入液体培养基中，26℃条件下振荡培养，分别取培养0、1、2、3、4、5、6天的培养液，测定发酵液还原糖、总糖、多糖等指标的含量变化，探讨引起指标变化的原因。 五、实验实施步骤 （一）制备PDA液体培养基 1.PDA液体培养基配方： 马铃薯20%，蛋白胨0.4％，葡萄糖2％，磷酸二氢钾0.3％，硫酸镁0.15％，pH自然。 2.配制、分装、高压灭菌： 按照培养基配置的一般方法进行配制液体培养基，并于500mL三角瓶中，分装150mL PDA液体培养基，于121℃下，灭菌30min。 （二）接种培养： 1.取平板菌丝体，利用接种刀均匀划分等量大小的菌丝体。 2.分别在4个装有PDA液体培养基的三角瓶中，等量接入平菇菌丝体。 3.将接有菌种的PDA液体培养基放入27℃下培养。 （三）取样 分别取接种当天、3天、4天、5天、6天、7天的发酵液。 （四）指标测定 1.还原糖测定按照3,5-二硝基水杨酸的方法。 2.总糖测定按照蒽酮硫酸比色法测定。 3.多糖测定按照多糖=总糖-还原糖 （五）发酵终点的判断 按照发酵液颜色、发酵液粘稠度、菌丝状态、还原糖、多糖、总糖的变化进行判断发酵终点。 六、思考问题 导致液体培养条件下污染的因素有哪些，实验过程中？.5倍行距） 一、实验项目：液体培养药用真菌发酵液多糖的提取与纯化 实验学时：8学时 实验类型：（设计性） 每组人数： 5 人/组 二、实验目的及要求 通过本实验的学习，使学生学会从发酵液中提取多糖的原理和方法，掌握液体离心、发酵液处理的技术，发酵液中多糖的纯化方法，掌握冷冻干燥的技术操作，为今后从事于微生物发酵奠定基础。） 三、实验主要仪器和制剂 主要仪器：离心机、冷冻干燥机、鼓风干燥箱、恒温水浴锅、量筒、烧杯、冰箱等。 试剂：95%乙醇10瓶，工业酒精10L，乙醚2瓶、丙酮2瓶等。 四、实验内容（一级标题：黑体，小四号。下同） 发酵液离心、发酵上清液的收集、发酵上清液浓缩、发酵液除蛋白、醇沉多糖、多糖的制备、多糖的纯化，多糖的结晶。 五、实验实施步骤 （一）发酵上清液的制备 荡培养 7后，从摇床中取出三角瓶，将其在 4000r/min，20min的条件下离心，取其上清液。 多糖的提取工艺 将离心得到的发酵上清液在不大于 90℃的条件下浓缩至原体积的 1/4，浓缩液在 4000r/min，20min的条件下离心，乙醇80％，80℃，2.5h小时条件下提取多糖，再将提取液在 4000r/min，20min条件下离心，所得沉淀即为粗多糖。的因素有哪些，实验过程中？.5倍行距） 一、实验项目：淀粉质原料的酒精发酵 实验学时：10学时 实验类型：（设计性） 每组人数： 5 人/组 二、实验目的及要求 通过本实验的学习，使学生学会液体发酵酿制米酒的技术，熟悉高温灭菌技术，掌握酒精蒸馏的方法和步骤，学会测定酒精的方法步骤，为今后从事于微生物酒精发酵奠定基础。） 三、实验主要仪器和制剂 主要仪器：恒温培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、分析天平、电磁炉、酒精计、移液管等。 试剂：酒曲，大米、罐头瓶等 四、实验内容（一级标题：黑体，小四号。下同） 淘洗浸泡糯米（淘洗3次，浸泡3~5小时，浸泡后的大米应保持完整，手捻易碎，断面无硬心） 蒸饭(时间25~30分钟，要求蒸出的饭粒外硬内软，内无白心，不糊不烂) 冷却：摊晾法，晾到饭温为30°左右 拌曲（拌曲量一般为米重的0.2%~0.3%） 糖化发酵（温度在28°~30°，一般2~3天即可来酒，香-甜-烈） 成熟出汁 酒渣分离 酒精含量的测定。