植物生理学实验2012~2013学年.docVIP

实验1 叶绿素a、b含量的测定（乙醇）（分光光度法） 一、目的 学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。 二、材料用具及仪器药品 菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95%） 三、原理 叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert Beer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式： D665=83.31Ca+18.60Cb…………………………….(1) D649=24.54Ca+44.24 Cb…………………………….(2) (1)(2)式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。 为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。 82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。 16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。 解方程式(1)(2)，则得 ： CA=13.7 D665—5.76 D649………………………(3) CB=25.8 D649—7.6 D665……………………… (4) G=CA+CB=6.10 D665+20.04 D649………(5) 此时，G为总叶绿素浓度，CA、CB为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。 四、方法步骤 1．称取0.05克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇1ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到10ml。 2．取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。 计算结果： 叶绿素a含量（mg/g. FW）= 叶绿素b含量（mg/g.FW）= 叶绿素总量（mg/g.FW）= 五、实验报告 计算所测植物材料的叶绿素含量。 六、思考题 1、分光光度法与一般比色法有何异同？ 2、叶绿素a、b在红光和蓝光区都有一最大吸收峰值，能否用蓝光区的最大吸收波长进行叶绿素a、b的定量分析，为什么？ 实验2生长素对根芽生长的不同影响 一、原理 生长素包括植物体内产生的吲哚乙酸及人工合成的化学试剂萘乙酸、2,4－D等，均有刺激植物生长的作用。如促进细胞的生长与分化，加速根、芽的伸长、促进果实的形成与种子的萌发等。但不同浓度作用不一样，一般来说，在浓度小或者用量少时有刺激生长的作用。在浓度大或者用量过多时，则抑制生长，甚至会导致植物死亡。不同器官和不同位置的组织对生长素的反应也不一样，如刺激芽生长的浓度比刺激根生长的浓度要大些。 二、仪器及试剂 （1）培养皿 （9cm） （2）移液管 （0.1ml；10ml） （3）10ppm萘乙酸 （4）滤纸（7cm） 三、实验步骤 1、洗净、烘干五套培养皿，在皿的边缘贴上标签，分别标明 （1）10ppm； （2）10-1ppm （3）10-3ppm （4）10-5ppm （5）蒸馏水； 2、在（1）皿中用10ml移液管加入10ppm萘乙酸溶液10ml； 3、在（2）－（5）皿中各加蒸馏水9.9ml； 4、用0.1ml移液管从（1）皿中吸取0.1ml萘乙酸溶液加入（2）皿充分混匀后，再从（2）皿中吸取0.1ml加入（3）皿中，如此继续稀释至（4）皿，即成各皿所标志浓度，最后从（4）皿吸出0.1ml弃去。 5、在每个培养皿中加入洁净的滤纸两张，纸上均匀排放大小相似而发芽一致（刚露白点）的水稻种子10粒，加盖后放在室内。 6、3－5天后，分别测量不同处理中萌发种子根、芽的长度。并将实验所测结果记录于下表，试比较不同浓度的萘乙酸溶液对于水稻幼苗根、芽生长的影响（促进或抑制） 不同浓度萘乙酸对水稻根芽生长的影响 浓度（ppm） 对照 10-5 10-3 10-1 10 平均根长(cm) 平均芽长(cm) 根为对照％ 芽为对照％ 备注： 1、水稻种子的萌发：在30℃下浸种2－3天，然后在30℃以下保湿催芽至露白点（约1－2天）。 2、1000ppm母液的配制：在分析天平上称萘乙酸0.1克用95％酒精少许将其溶解后，倒入100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。 3、10ppm萘乙酸溶液的配制：用移液管吸取母液1ml，加蒸馏水定容于100ml容量瓶中。 四、注意事项 1、生长素浓度要尽量配制准确。 2、试验中要防止生长素污染。 五、思考题： 在进行生长素实验时，为什么要用NAA代替IAA？