植物生理学开放性实验.docVIP

实验课题名称: 不同环境因子对植物体叶绿体a和b的影响 选题背景或文献综述： 背景：出于平时的观察发现桂花树新叶偏淡红绿，而老叶偏深蓝。对此产生了兴趣，所以做了这个实验深入研究。 文献：【1】《植物生理学实验指导》第四版（叶绿素a、b含量的测定P58—59页） 主编张志良、翟伟箐、李小方。高等教育出版社。 【2】《植物生理学》第六版（叶绿素主要有叶绿素a、b两种。它们不溶于水但能溶于酒精、丙酮和石油醚等有机溶剂所以后面用丙酮作为溶剂，叶绿素吸光的能力极强。如果把叶绿素的溶液放在光源和分光镜的中间，就可以看到光谱中有些波长的光被吸收了。因此，在光谱上出现黑线或暗带，这种光谱称为吸收光谱。叶绿素吸收光谱的最强的吸收区有两个：一个在波长为640~660nm的红光部分，另一个在波长为430~450nm的蓝紫光部分。光谱中的橙光、黄光和绿光部分只有不明显的吸收带，其中尤以对绿光的吸收最少。在由各色混合起来的白光中，红、蓝光被叶绿素大量吸收，而绿光则很少被吸收，所以叶子呈现绿色，叶绿素溶液也呈绿色。所以测叶绿素a、b时在波长645nm和663nm两个波段测定。主编：潘瑞炽、王小青、李娘辉等，高等教育出版社 【3】《植物学》第二版上 【4】健康而尚未衰老的阳生植物叶片的叶绿素a/b比值通常为3 左右, 阴生植物叶片的该比值会低一些, 而缺乏叶绿素 b 的突变体的该比值可能会大于10 Xu 等1993 。最近有人报告, 10 种树木叶片的叶绿素a/b 比值在1.6~2.3 之间 任芳菲等2009 , 明显偏低。与此相类似的是, 对钾利用能力不同的 2个基因型水稻在钾缺乏和正常供钾条件下叶片的叶绿素a/b 比都为0.5 左右 Jia 等2008 , 太低, 不可信。可能是分光光度计精度不够, 或者测定或计算方法有问题。所以, 在对样品的叶绿素提取液进行比色测定时, 应该选用对测定光波长分辨率高的分光光度计, 这对于叶绿素 a/b 比值的测定至为重要。另外, 用于比色测定的叶绿素提取液的浓度过高, 也会导致叶绿素a/b比值的明显降低 陈根云等,未发表资料 叶绿素含量的测定及其应用中的几个问题 许大全*中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海 200032 【5】ABC 李宝华 朱明远7 南极长城湾潮间带叶绿素*的分布及变化ADE7 黄渤海海洋7 FGGG FH #I$!JK!LI7 三、实验目的和要求： 1．熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿素a和叶绿素b的方法及其计算 2．并学会从结果去分析结论 四、实验条件： 1.实验仪器 高级型分光光度计、离心机、台天平、剪刀、研钵、漏斗、移液管。 2.实验试剂 丙酮、石英砂、碳酸钙。 3.实验材料 挂花树的新叶和老叶。 五、实验原理与方法： 外界环境因子（如光照、温度、矿质元素等）的变化会影响植物叶绿体色素的含量。 如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽有明显的差异，但吸收曲线彼此又有些重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据Lamber-Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对吸光度的影响，最后分别得到两种组分的含量。 叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在 663 nm，叶绿素b在 645nm，吸收曲线彼此又有重叠。【2】 根据Lambert－Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与吸光度A之间有如下的关系。 OD663 82.04 Ca+9.27Cb OD645 16.75 Ca+45.60Cb 经过整理之后，得到下列公式 Ca 0.0127OD663－0.00269OD645 …………（１） Cb 0.0229A645—0.00468A663 …………… （２） 经过整理之后，把Ca、Cb的浓度单位从原来的 g／L改为mg／L，则可改写为下列形式： Ca 12.7A663－2.69A645 ……………… （3） Cb 22.9A645—4.68A663 …………… （4） CT＝Ca＋Cb 8.02 A663+20.21A645……（5） 算式中 CT为总叶绿素浓度，单位为 mg/L。 利用上面公式，即可计算出叶绿素a和b及总叶绿素的浓度。 六、实验方案或实验步骤设计： 1、实验材料的培养和处理:试验前采用不同环境条件对材料进行培养越一周后进行测量． 2、色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎片，称取0.25放入研钵中加纯丙酮2.5ml。少许碳酸钙和石英砂，研磨成浆，再加80%丙酮2.5ml，将匀浆转入离心管，并用适量80%丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清夜用80%丙酮定容至１0ml。 3、测定光密度：取上述色素提取液1ml，加80%丙酮4ml稀释后转入比